本文關(guān)鍵詞：基于雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)信號放大和磁分離技術(shù)熒光檢測端粒酶活性

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【摘要】：端粒酶是由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白酶,它一般在癌細(xì)胞中被激活.它與端粒DNA的不斷復(fù)制以及癌細(xì)胞的不斷增殖密切相關(guān).所以檢測端粒酶的活性對癌癥的早期診斷以及以端粒酶為靶標(biāo)分子的抗癌藥物的開發(fā)具有重要意義.利用雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR)無酶放大檢測信號,建立了一種簡單、快速的端粒酶活性檢測方法.端粒酶延伸產(chǎn)物是一條末端具有(ggttag)_n重復(fù)序列的DNA.在實驗過程中,通過鏈霉親合素與生物素的特異性作用將端粒酶延伸產(chǎn)物連接在磁性微球上.設(shè)計一條端粒酶延伸產(chǎn)物特異性的DNA探針I(yè)作為雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的引發(fā)探針.DNA探針I(yè)的3′-端與端粒酶延伸產(chǎn)物的重復(fù)序列匹配,通過雜交,DNA探針I(yè)被固定在磁球上;DNA探針I(yè)的5′-端引發(fā)DNA探針I(yè)I和探針I(yè)II發(fā)生雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng).DNA探針I(yè)I和探針I(yè)II上都標(biāo)記有熒光基團(tuán),可以利用熒光直接進(jìn)行信號檢測.在反應(yīng)過程中,通過磁分離去除多余未反應(yīng)的三種DNA探針.在優(yōu)化條件下,可以檢測到1.0×10~5個Hela細(xì)胞中的端粒酶活性.該方法簡單、快速、檢測成本低,分析全程無酶參與,在腫瘤或癌癥的臨床診斷以及以端粒酶為靶標(biāo)分子的抗癌藥物的篩選上具有廣闊的應(yīng)用前景.
【作者單位】： 河北大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 端粒酶活性 雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 無酶信號放大 熒光檢測 磁分離
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金(No.21405032) 教育部博士點基金(No.20121301120006)資助~~
【分類號】：O657.3
【正文快照】： Received March 18,2016;published April 29,2016.Project supported by the National Natural Science Foundation of China(No.21405032)and the Specialized Research Fund for the Doctoral Program ofHigher Education of China(No.20121301120006).項目受國家自然科學(xué)

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1 黃艷萍,孔德明,張曉濱,沈含熙,宓懷風(fēng);復(fù)合式蝎形引物實時定量檢測端粒酶延伸產(chǎn)物[J];化學(xué)學(xué)報;2004年03期

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本文編號：909266