本文關(guān)鍵詞：秋水仙堿修飾的納米硒靶向MCF-7細胞誘導(dǎo)其凋亡的研究

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【摘要】：硒納米材料具有很好的生物活性,可通過偶聯(lián)或吸附對納米硒進行各種修飾�；谠恿︼@微鏡在納米水平表征藥物的細胞毒性是一種新興的藥物藥效評估方法,本文制備了秋水仙堿修飾的納米硒顆粒,采用紅外光譜儀,紫外可見分光光度儀,高倍透射電鏡以及Nano-ZS納米粒度儀對所制備秋水仙堿修飾納米硒的形貌結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性進行表征,同時利用CCK-8、流式細胞分析儀、激光共聚焦顯微鏡(CLSM)及原子力顯微鏡(AFM)等評價秋水仙堿修飾的納米硒對乳腺癌MCF-7細胞毒性作用及抑制血管生成作用。本課題主要獲得了以下創(chuàng)新性成果1.在有秋水仙堿分子存在的水溶液體系中,以殼聚糖(CS)為穩(wěn)定劑和包覆劑,利用抗壞血酸還原亞硒酸鈉的方法合成球形納米硒顆粒,該納米硒顆粒的平均粒徑為70 nm,秋水仙堿通過其羧酸部分的-OH鍵與納米硒表面發(fā)生作用并吸附到納米顆粒的表面,從而使秋水仙堿成功穩(wěn)定的修飾上納米硒顆粒2.CCK-8實驗和流式細胞儀檢測結(jié)果表明秋水仙堿納米硒能夠抑制人乳腺癌細胞MCF-7細胞的增殖,誘導(dǎo)細胞凋亡,且對正常細胞殺傷作用較小;流式細胞儀檢測結(jié)果表明,秋水仙堿納米硒能抑制細胞增殖且將細胞周期阻滯在S期;通過CLSM成像觀察,秋水仙堿納米硒能夠顯著破壞MCF-7細胞微管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),抑制紡錘體形成及細胞的遷移運動,同時利用原子力顯微鏡對秋水仙堿納米硒作用細胞前后的細胞形貌、表面超微結(jié)構(gòu)進行掃描成像,結(jié)果顯示,隨藥物濃度的增加,細胞形貌發(fā)生顯著性變化,細胞膜遭到不同程度的破壞,膜表面平均粗糙度和膜表面納米顆粒的平均粒徑增大。3.秋水仙堿納米硒作用于血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)后,細胞存活率下降;流式細胞儀結(jié)果表明,秋水仙堿納米硒能夠誘導(dǎo)HUVEC的凋亡和壞死;體外小管形成實驗表明,藥物能夠阻礙HUVEC細胞小管生成,體內(nèi)實驗雞胚尿囊膜血管形成實驗說明,秋水仙堿納米硒能夠抑制血管生成。綜上所述,秋水仙堿納米硒通過破壞細胞微管動態(tài)平衡,抑制細胞增殖,誘導(dǎo)細胞凋亡。此外,秋水仙堿納米硒還能夠通過抑制血管內(nèi)皮細胞的增殖,從而抑制血管的生成,這些結(jié)果表明,秋水仙堿納米硒能夠成為一種潛在的抗癌藥物。
【關(guān)鍵詞】：秋水仙堿修飾納米硒 MCF-7細胞 HUVEC 微管 抗血管生成 原子顯微鏡
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96;O613.52
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 緒論10-23
• 1 原子力顯微鏡10-18
• 1.1 原子力顯微鏡的工作原理及模式10-14
• 1.2 原子力顯微鏡在生物學上的優(yōu)勢14-15
• 1.3 原子力顯微鏡在生物學上的應(yīng)用15-18
• 2 靶向微管的抗腫瘤作用18-21
• 2.1 微管的結(jié)構(gòu)和作用19
• 2.2 微管蛋白抑制劑的抗腫瘤作用研究進展19-21
• 3 納米硒的研究背景21-23
• 3.1 納米硒的生物活性21
• 3.2 納米硒抗癌活性的研究進展21-23
• 第二章 秋水仙堿修飾納米硒的制備與表征23-31
• 1 前言23
• 2 實驗材料與方法23-25
• 2.1 實驗儀器與試劑23-24
• 2.2 實驗步驟與方法24-25
• 3 實驗結(jié)果與討論25-29
• 3.1 紫外光譜結(jié)果25-26
• 3.2 紅外吸收光譜結(jié)果26-27
• 3.3 納米粒度表針結(jié)果27-28
• 3.4 透射電鏡表征結(jié)果28-29
• 4 本章小結(jié)29-31
• 第三章 秋水仙堿納米硒對人MCF-7 細胞凋亡情況的影響31-45
• 1 前言31
• 2 實驗材料與方法31-35
• 2.1 實驗試劑與材料31-32
• 2.2 細胞方法和步驟32-35
• 3 實驗結(jié)果與討論35-43
• 3.1 秋水仙堿納米硒對MCF-7 細胞增殖抑制實驗結(jié)果分析35-36
• 3.2 細胞凋亡和壞死分布分析36-37
• 3.3 MCF-7 細胞周期分布分析37-39
• 3.4 細胞骨架微管蛋白表達檢測結(jié)果分析39-40
• 3.5 激光共聚焦顯微鏡觀察秋水仙堿納米硒對MCF-7 細胞微管系統(tǒng)的影響40-41
• 3.6 原子力顯微鏡對MCF-7 形貌的的影響41-43
• 4 本章總結(jié)43-45
• 第四章 COL-Se NPs抑制HUVEC細胞的增殖與抗血管生成作用45-59
• 1 前言45
• 2 實驗材料和方法45-49
• 2.1 實驗材料與儀器45-46
• 2.2 細胞方法和步驟46-49
• 3 結(jié)果與討論49-57
• 3.1 CCK-8 細胞增殖抑制實驗結(jié)果分析49
• 3.2 細胞凋亡與壞死檢測結(jié)果分析49-50
• 3.3 細胞骨架微管蛋白的表達結(jié)果分析50-51
• 3.4 激光共聚焦顯微鏡觀察秋水仙堿納米硒對HUVEC細胞微管系統(tǒng)的影響51-53
• 3.5 原子力顯微鏡對HUVEC形貌的的影響53-55
• 3.6 秋水仙堿納米硒對HUVEC遷移能力的影響55
• 3.7 秋水仙堿納米硒抑制HUVEC小管的形成55-56
• 3.8 雞胚絨毛尿囊膜（CAM）實驗56-57
• 4 本章小結(jié)57-59
• 展望59-60
• 參考文獻60-67
• 附錄一 英文縮略語67-68
• 攻讀碩士期間科研工作情況68-70
• 致謝70

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