本文關(guān)鍵詞：低濃度甲醛對多肽和蛋白化學(xué)修飾的質(zhì)譜研究

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【摘要】：采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)和納升電噴霧四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(Nano-ESI-QTOF MS)技術(shù),以標準肽段和流感病毒基質(zhì)蛋白酶切肽段為模型,研究了甲醛對蛋白質(zhì)和多肽主鏈的修飾作用。采用與實際病毒滅活過程一致的實驗條件(4℃,0.025%(V/V)福爾馬林(37%(w/w)甲醛溶液)處理72 h),進行甲醛與多肽的化學(xué)反應(yīng)。結(jié)果表明,在實驗條件下,甲醛能與標準肽段N端的氨基反應(yīng)生成羥甲基加合物,再發(fā)生縮合反應(yīng)生成亞胺,形成+12 Da的產(chǎn)物。此外,甲醛還能與標準肽段中的精氨酸、賴氨酸的側(cè)鏈發(fā)生反應(yīng),生成+12 Da的反應(yīng)產(chǎn)物。對流感病毒基質(zhì)蛋白的酶切肽段與甲醛的反應(yīng)的質(zhì)譜分析結(jié)果顯示,多數(shù)的肽段都生成了+24 Da的產(chǎn)物,質(zhì)量的增加來源于肽段N端氨基(+12 Da)和C端精氨酸或賴氨酸的側(cè)鏈(+12 Da)的貢獻。此外,還觀察到有一個漏切位點的肽段生成了+36 Da的產(chǎn)物。本研究結(jié)果表明,在實驗條件下,低濃度甲醛主要與肽段和蛋白的N端氨基,以及精氨酸和賴氨酸側(cè)鏈發(fā)生反應(yīng)。本研究為分析低濃度甲醛與蛋白質(zhì)的反應(yīng)產(chǎn)物提供了有效的質(zhì)譜分析方法和解譜依據(jù)。
【作者單位】： 吉林大學(xué)第二醫(yī)院;吉林亞泰生物藥業(yè)股份有限公司;吉林大學(xué)人獸共患病研究所人獸共患病研究教育部重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 甲醛 多肽 基質(zhì)蛋白 化學(xué)修飾 質(zhì)譜
【基金】：國家自然科學(xué)基金(Nos.81472030,31372409,21175055) 吉林省科技廳項目(Nos.20110739,20150204001YY) 吉林大學(xué)白求恩計劃B(2012210)資助~~
【分類號】：O657.63;O629.7
【正文快照】： 1引言在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,甲醛被廣泛用于臨床組織樣本的固定,以及毒素和病毒的滅活等。甲醛能與生物大分子尤其是蛋白質(zhì)的活性基團發(fā)生反應(yīng),從而將蛋白質(zhì)交聯(lián)、失活,甚至固定。在致病微生物尤其是高致病性微生物(如禽流感病毒)的研究中,經(jīng)常使用一定濃度的甲醛溶液處理樣本,使微，

本文編號：847936