本文關(guān)鍵詞：中藥活性成分對(duì)蛋白質(zhì)的構(gòu)象影響及其機(jī)理研究

  更多相關(guān)文章： 黃楊素D 豆腐果苷 橙黃決明素 蛋白質(zhì) 光譜分析法

【摘要】：傳統(tǒng)中醫(yī)在現(xiàn)代醫(yī)療體系中發(fā)揮了不可替代的作用。中醫(yī)大量使用的中草藥含有的藥用活性成分,這些活性成分發(fā)揮治療作用的機(jī)理是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)的研究熱點(diǎn)。而蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的具體功能實(shí)現(xiàn)者,藥物分子大部分是通過(guò)與蛋白質(zhì)結(jié)合,改變了具有特定功能的蛋白質(zhì)原始結(jié)構(gòu),從而改變了蛋白質(zhì)的性質(zhì)并且發(fā)揮其應(yīng)有的作用。本文中,我們選取了人體循環(huán)系統(tǒng)中含量最多的蛋白質(zhì)—人血清白蛋白(HSA)和消化系統(tǒng)中消化酶的主要成分之一—胃蛋白酶(pepsin),并且從中藥活性成分中的三個(gè)大類—甾族化合物、苷類化合物、醌類化合物中分別選取了黃楊素D(CVB)、豆腐果苷(helicid)和橙黃決明素(AO)作為研究對(duì)象,利用多種研究方法,包括穩(wěn)態(tài)熒光、同步熒光(SFS)、時(shí)間分辨熒光壽命、紫外-可見光吸收(UV-vis)、傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)、圓二色譜(CD)、分子模擬對(duì)接(Molecular Modeling),系統(tǒng)性地研究并描述了人血清白蛋白或胃蛋白酶與黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素之間的相互作用類型、性質(zhì)和有關(guān)參數(shù),并比較了橙黃決明素與胃蛋白酶和人血清白蛋白之間的相互作用的異同。結(jié)論:熒光猝滅數(shù)據(jù)證明了黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素都能能猝滅HSA或胃蛋白酶的熒光,說(shuō)明黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素均與HSA或胃蛋白酶發(fā)生了相互作用。同步熒光數(shù)據(jù)表明黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素猝滅了HSA中色氨酸殘基Trp214和酪氨酸殘基的熒光,對(duì)于胃蛋白酶則是胃蛋白酶中的Trp39的熒光。溫度控制熒光猝滅實(shí)驗(yàn)表明:第一,黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素猝滅HSA或胃蛋白酶的熒光的機(jī)理全部屬于靜態(tài)猝滅機(jī)理。第二,豆腐果苷與HSA的結(jié)合是由疏水作用力,包括一定量的氫鍵作用力驅(qū)動(dòng)的,而CVB與HSA的結(jié)合不同,CVB與HSA之間的相互作用力主要是氫鍵作用力和范德華力,橙黃決明素與HSA或者胃蛋白酶的結(jié)合則主要由靜電作用驅(qū)動(dòng),且結(jié)合位點(diǎn)數(shù)皆為1。紫外-可見光吸收數(shù)據(jù)表明黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素與蛋白質(zhì)的結(jié)合均改變了HSA或胃蛋白酶的二級(jí)結(jié)構(gòu)。傅里葉變換紅外光譜和圓二色譜數(shù)據(jù)表明黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素改變了HSA二級(jí)結(jié)構(gòu)中的α-螺旋結(jié)構(gòu)的含量,橙黃決明素與胃蛋白酶的結(jié)合則是改變了胃蛋白酶中β-折疊的含量。分子對(duì)接模擬實(shí)驗(yàn)表明,黃楊素D、豆腐果苷、橙黃決明素與HSA的對(duì)接位點(diǎn)都位于siteΙ,橙黃決明素與胃蛋白酶的對(duì)接位點(diǎn)位于胃蛋白酶橢球形結(jié)構(gòu)的中央疏水空腔。非輻射能量轉(zhuǎn)移方法計(jì)算表明HSA與黃楊素D、豆腐果苷的結(jié)合距離全部小于8 nm。時(shí)間分辨熒光壽命實(shí)驗(yàn)說(shuō)明橙黃決明素猝滅HSA或胃蛋白酶的機(jī)理均屬于靜態(tài)猝滅機(jī)理。
【關(guān)鍵詞】：黃楊素D 豆腐果苷 橙黃決明素 蛋白質(zhì) 光譜分析法
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.3;R284
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 緒論11-31
• 1.1 引言11-13
• 1.2 中草藥中的活性成分對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)的影響13-22
• 1.2.1 甾族化合物與皂苷15-19
• 1.2.2 苷類化合物19-21
• 1.2.3 醌類化合物21-22
• 1.3 人血清白蛋白（HSA）與胃蛋白酶（Pepsin）22-24
• 1.3.1 HSA與Pepsin的簡(jiǎn)要介紹22
• 1.3.2 HSA與Pepsin的結(jié)構(gòu)22-24
• 1.4 研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)的方法24-27
• 1.4.1 熒光光譜法24
• 1.4.2 紫外-可見光吸收光譜（UV-vis）24-25
• 1.4.3 傅立葉變換紅外光譜（FT-IR）25
• 1.4.4 遠(yuǎn)紫外圓二色譜（CD）25-26
• 1.4.5 分子對(duì)接技術(shù)26
• 1.4.6 凝膠色譜法26
• 1.4.7 毛細(xì)管電泳法26-27
• 1.5 中藥活性成分改變蛋白質(zhì)構(gòu)象與性質(zhì)的研究成果27-31
• 第二章 黃楊素D對(duì)人血清白蛋白構(gòu)象與性質(zhì)的影響研究31-45
• 2.1 引言31-32
• 2.2 所用藥品與方法32-34
• 2.2.1 藥品與儀器32
• 2.2.2 操作與方法32-33
• 2.2.3 熒光猝滅法基本原理與操作33-34
• 2.2.4 分子模擬對(duì)接技術(shù)34
• 2.3 結(jié)果與討論34-44
• 2.3.1 CVB-HSA體系熒光分析結(jié)果34-37
• 2.3.2 熱力學(xué)數(shù)據(jù)分析37-38
• 2.3.3 其他光譜數(shù)據(jù)結(jié)果分析38-41
• 2.3.4 分子對(duì)接結(jié)果41-42
• 2.3.5 HSA與CVB之間的能量轉(zhuǎn)移42-44
• 2.4 本章小結(jié)44-45
• 第三章 豆腐果苷改變?nèi)搜灏椎鞍捉Y(jié)構(gòu)與性質(zhì)的機(jī)理研究45-57
• 3.1 引言45-46
• 3.2 儀器、藥品和方法46-47
• 3.3 結(jié)果與討論47-55
• 3.3.1 豆腐果苷猝滅HSA熒光的結(jié)果47-48
• 3.3.2 熱力學(xué)數(shù)據(jù)分析48-49
• 3.3.3 分子對(duì)接結(jié)果分析49-50
• 3.3.4 同步熒光數(shù)據(jù)結(jié)果與分析50-51
• 3.3.5 傅立葉變換紅外光譜結(jié)果與分析51-52
• 3.3.6 圓二色譜數(shù)據(jù)結(jié)果與分析52-53
• 3.3.7 3D熒光數(shù)據(jù)結(jié)果與分析53-54
• 3.3.8 HSA與豆腐果苷之間的能量轉(zhuǎn)移54-55
• 3.4 本章小結(jié)55-57
• 第四章 橙黃決明素對(duì)人血清白蛋白或胃蛋白酶結(jié)構(gòu)與性質(zhì)的改變及其機(jī)理研究57-85
• 4.1 引言57-58
• 4.2 藥品與方法58-61
• 4.2.1 藥品58
• 4.2.2 儀器與方法58-61
• 4.3 結(jié)果與討論61-82
• 4.3.1 穩(wěn)態(tài)熒光數(shù)據(jù)結(jié)果分析61-66
• 4.3.2 同步熒光（SFS）數(shù)據(jù)分析66-68
• 4.3.3 3D熒光數(shù)據(jù)結(jié)果68-69
• 4.3.4 紫外-可見光（UV-vis）吸收數(shù)據(jù)結(jié)果分析69-71
• 4.3.5 傅里葉變換紅外吸收光譜71-75
• 4.3.6 圓二色譜數(shù)據(jù)結(jié)果與分析75-76
• 4.3.7 熱力學(xué)數(shù)據(jù)分析76
• 4.3.8 時(shí)間分辨熒光壽命數(shù)據(jù)結(jié)果76-78
• 4.3.9 計(jì)算機(jī)模擬分子對(duì)接結(jié)果78-81
• 4.3.10 位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果81-82
• 4.4 本章小結(jié)82-85
• 第五章 總結(jié)與展望85-87
• 參考文獻(xiàn)87-97
• 致謝97-99
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文99-100

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