發(fā)布時間：2017-09-01 22:18

  本文關(guān)鍵詞：基于雙鏈特異性核酸酶介導(dǎo)的MicroRNAs檢測新方法的研究

  更多相關(guān)文章： MicroRNAs檢測 DSN核酸酶 信號擴(kuò)增 納米金 聚多巴胺納米球 化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移

【摘要】：MicroRNAs(miRNAs)是由大的發(fā)卡型前體經(jīng)過Dicer等酶的加工形成的小的、內(nèi)源性非編碼RNA,其長度約22個堿基左右。miRNAs可以通過組裝成為有活性的RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)來抑制基因表達(dá)。大量研究表明,miRNAs在細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答等多種生物過程中起著重要作用。大量研究表明,miRNAs的異常表達(dá)跟癌癥的發(fā)生和形成息息相關(guān),可以作為生物標(biāo)記物用于診斷和預(yù)知及作為新藥的作用靶標(biāo)用于疾病治療。雙鏈特異性核酸酶(duplex-specific nuclease,DSN)是一種來自勘察加半島擬石蟹屬螃蟹胰肝腺中的核酸酶。DSN酶具有獨(dú)特的底物特異性,只降解雙鏈DNA及DNA/RNA雜交鏈中的DNA鏈,不可水解單鏈DNA、單鏈RNA及雙鏈RNA。此外,DSN酶在一定長度內(nèi)可以區(qū)分單堿基差異,賦予了DSN酶更加獨(dú)特的性質(zhì)。因此,DSN酶作為工具酶在生物醫(yī)藥、生物科學(xué)應(yīng)用及生物分析等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用前景。利用DSN酶的獨(dú)特性質(zhì),將其作為信號放大工具應(yīng)用于miRNAs的特異性檢測,可以克服許多由miRNAs自身特點(diǎn)帶來的檢測弊端,包括家族序列同源性高難以區(qū)分、長度短難以檢測及表達(dá)水平低等問題。我們利用DSN核酸酶的特性,結(jié)合納米金消光系數(shù)大以及聚多巴胺納米球(PDA)具有獨(dú)特的吸附單鏈核酸及化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),分別設(shè)計了納米金聚集比色法及化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移法用于miRNAs的特異性檢測,操作簡便,成本低廉,檢測限可達(dá)pM級,并應(yīng)用于細(xì)胞裂解液中miRNAs的分析檢測。
【關(guān)鍵詞】：MicroRNAs檢測 DSN核酸酶 信號擴(kuò)增 納米金 聚多巴胺納米球 化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第1章 緒論9-24
• 1.1 miRNA檢測9-14
• 1.1.1 miRNA介紹9-10
• 1.1.2 miRNA作為癌癥生物標(biāo)志物特點(diǎn)10
• 1.1.3 miRNA檢測的意義10-11
• 1.1.4 miRNA檢測的方法11-14
• 1.1.5 展望14
• 1.2 DSN酶在分析檢測領(lǐng)域的應(yīng)用14-21
• 1.2.1 DSN酶簡介14-15
• 1.2.2 基于DSN酶介導(dǎo)的miRNA檢測15-21
• 1.3 納米技術(shù)的優(yōu)勢21-23
• 1.4 本研究的內(nèi)容及意義23-24
• 第2章 雙鏈特異性核酸酶性質(zhì)的研究24-34
• 2.1 引言24-25
• 2.2 實(shí)驗部分25-30
• 2.2.1 實(shí)驗材料及主要儀器25-26
• 2.2.2 實(shí)驗步驟26-30
• 2.3 實(shí)驗結(jié)果與討論30-33
• 2.3.1 金屬離子對DSN酶活性的影響30
• 2.3.2 溶液的pH值對DSN酶活性的影響30-31
• 2.3.3 反應(yīng)溫度對DSN酶活性的影響31
• 2.3.4 雙鏈DNA為底物的DSN酶特性的探究31-32
• 2.3.5 以DNA-RNA為底物的DSN酶特性的探究32-33
• 2.4 小結(jié)33-34
• 第3章 基于雙鏈特異性核酸酶介導(dǎo)的納米擴(kuò)增比色法特異性檢測miRNA34-50
• 3.1 引言34-35
• 3.2 實(shí)驗原理35-36
• 3.3 實(shí)驗部分36-41
• 3.3.1 實(shí)驗材料及儀器36-38
• 3.3.2 實(shí)驗步驟38-41
• 3.4 實(shí)驗結(jié)果與討論41-48
• 3.4.1 可行性分析41-42
• 3.4.2 納米金聚集前后及修飾前后的表征42-43
• 3.4.3 實(shí)驗條件優(yōu)化43-45
• 3.4.4 靈敏度研究45-46
• 3.4.5 選擇性研究46-47
• 3.4.6 實(shí)樣檢測47-48
• 3.5 小結(jié)48-50
• 第4章 基于雙鏈特異性核酸酶和聚多巴胺納米球介導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移平臺檢測miRNA50-66
• 4.1 引言50-51
• 4.2 實(shí)驗原理51-52
• 4.3 實(shí)驗部分52-57
• 4.3.1 實(shí)驗材料及儀器52-53
• 4.3.2 實(shí)驗步驟53-57
• 4.4 實(shí)驗結(jié)果及討論57-65
• 4.4.1 PDA的表征57
• 4.4.2 可行性分析57-59
• 4.4.3 實(shí)驗條件優(yōu)化59-61
• 4.4.4 靈敏度研究61-62
• 4.4.5 選擇性實(shí)驗62-63
• 4.4.6 實(shí)樣檢測63-65
• 4.5 小結(jié)65-66
• 第5章 總結(jié)與展望66-68
• 參考文獻(xiàn)68-75
• 附錄75-76
• 致謝76-78
• 卷內(nèi)備考表78

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本文編號：774717