本文關(guān)鍵詞：基于“分段”-“完整”轉(zhuǎn)化的G-四鏈體脫氧核糖核酸酶傳感器用于多聚核苷酸激酶的檢測

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【摘要】：采用"分段"轉(zhuǎn)化為"完整"G-四鏈體脫氧核糖核酸酶的策略,構(gòu)建了檢測多聚核苷激酶(T4 PNK)的傳感器。將形成G-四鏈體的富G序列PS5.M序列拆分成5'和3'端均為羥基的兩條鏈:鏈S_1OH和鏈S_2OH即分別具有12個(gè)堿基的"分段"的PS5.M。在ATP存在下,T4 PNK酶可以將鏈S_2OH的5'端的羥基磷酸化,轉(zhuǎn)化為S_2P;在S_1OH、S_2P以及Helper鏈S-H存在下,T4 DNA連接酶(T4 DNA Ligase)將鏈S_1OH和鏈S_2P連接成"完整"的PS5.M序列。在體系中再加入核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ),從S-H的3'端剪切S-H,釋放出PS5.M。在K~+存在下,PS5.M與氯化血紅素(Henfin)作用,形成具有類過氧化物酶活性的復(fù)合物,催化H_2O_2氧化2 2'-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)的反應(yīng),通過檢測氧化產(chǎn)物在418 nm處的吸收值變化,實(shí)現(xiàn)對(duì)T4 PNK活性的定量檢測。線性檢測范圍為0.02~3.0 U/mL艙出限為0.014 U/mL(S/N=3)。對(duì)Hela細(xì)胞和HEK293細(xì)胞實(shí)際樣本的T4 PNK活性進(jìn)行了檢測,平均回收率為95.6%~105.7%。
【作者單位】： 中國科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所;
【關(guān)鍵詞】： 多聚核苷酸激酶 脫氧核糖核酸酶 G-四鏈體 生物傳感器
【基金】：國家自然科學(xué)基金(Nos.31301495,21275156,21305154)資助~~
【分類號(hào)】：O657.3;TP212
【正文快照】： 1引言T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)是Richardson于1965年研究T4噬菌體侵襲大腸桿菌的過程中發(fā)現(xiàn)的[1]。T4 PNK酶可以催化ATP的γ-位或3'-單磷酸核苷的磷酸基團(tuán)與寡核苷酸鏈(雙鏈DNA和單鏈DNA或RNA)的5'-羥基基團(tuán)進(jìn)行轉(zhuǎn)移和交換,實(shí)現(xiàn)寡核苷酸的5'磷酸化或者3'去磷酸化,在基因克隆

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 歐麗娟;劉宏偉;;基于核酸外切酶酶切反應(yīng)的納米金比色法檢測T4多聚核苷酸激酶活性[J];分析試驗(yàn)室;2014年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陶芒娟;T4多聚核苷酸激酶活性和抑制的熒光分析研究[D];陜西師范大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：768067