本文關(guān)鍵詞：基于HPLC的標(biāo)準(zhǔn)加入法同時(shí)測定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸

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【摘要】：目的建立一種同時(shí)測定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸濃度的高效液相色譜(HPLC)法,用于評價(jià)小鼠給予IDO抑制劑后體內(nèi)IDO活性。方法血清用6%高氯酸沉淀蛋白法處理,離心后取上清進(jìn)樣,采用標(biāo)準(zhǔn)加入法定量。選用ThermoHypersil GOLD色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分離,流動相為乙腈-醋酸鈉(15mmol/L,冰醋酸調(diào)pH至4.0),流速1.1 mL/min,柱溫30℃,犬尿氨酸和色氨酸的紫外檢測波長分別為360 nm和280 nm。結(jié)果犬尿氨酸保留時(shí)間為6.10 min,線性范圍為0.25~10μmol/L,檢測限為0.09μmol/L;色氨酸保留時(shí)間10.12 min,線性范圍為25~1 000μmol/L,檢測限為0.25μmol/L。精密度、回收率及穩(wěn)定性等均符合生物樣品定量分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則的要求,并成功應(yīng)用于62只小鼠血清犬尿氨酸和色氨酸濃度的測定。結(jié)論建立了一種簡單、快速、準(zhǔn)確的HPLC分析方法,采用標(biāo)準(zhǔn)加入定量方式,可同時(shí)測定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸血藥濃度,并成功應(yīng)用于實(shí)際生物樣本的測定。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院藥物分析教研室;復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 犬尿氨酸 色氨酸 HPLC 血清 標(biāo)準(zhǔn)加入法 小鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81373396;81573310) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(20130071110037)~~
【分類號】：R965;O657.72
【正文快照】： 色氨酸(tryptophan,Trp)是哺乳類動物合成必需的氨基酸之一,也是構(gòu)成蛋白質(zhì)的重要成分,還可以在肝、腎等組織中代謝成為生物活性分子。在哺乳類動物中其主要有兩條代謝途徑:一是在羥化酶的作用下生成5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT),另一條是生成犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)

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本文編號：718978