本文關(guān)鍵詞：乳及乳制品真實屬性多重實時熒光PCR檢測方法研究

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【摘要】：運用實時熒光PCR檢測技術(shù)對乳及乳制品中牛、羊、大豆、谷物及植物源性成分進行分析檢測,以鑒定乳及乳制品的真實屬性。在建立穩(wěn)定的單重實時熒光PCR檢測方法基礎(chǔ)上,研究確立多重實時熒光PCR檢測方法,實現(xiàn)乳及乳制品中多種目標物種基因的高通量快速篩查檢測。本課題研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:(1)乳及乳制品DNA提取方法研究。本研究比較了異硫氰胍結(jié)合苯酚-氯仿法、改良試劑盒法和磁珠法這三種方法所提取乳及乳制品DNA的質(zhì)量。結(jié)果證明,改良試劑盒法提取的核酸質(zhì)量最高,本研究后續(xù)PCR反應中樣本DNA提取均采用改良試劑盒法進行提取。(2)實時熒光PCR檢測體系的建立。分別以牛cytb基因、羊12S rRNA基因、大豆lectin基因、谷物rbcL基因、植物tRNAleu基因作為靶基因合成特異性的引物與探針,建立各組分的單重實時熒光PCR檢測體系,并設(shè)計實驗驗證合成引物和探針的特異性。通過驗證,確定所合成的牛、羊、大豆、谷物及植物源性成分的引物與探針只針對目標物種DNA有擴增曲線,未出現(xiàn)非特異性擴增,說明所建立的PCR反應體系特異性良好。(3)多重實時熒光PCR檢測體系的建立。通過對實時熒光PCR反應體系和反應參數(shù)優(yōu)化,成功建立了單重、雙重以及三重實時熒光PCR檢測方法,實現(xiàn)牛、羊、大豆、植物、谷物源性各成分之間的實時同步檢測。(4)方法特異性與靈敏度測試。通過陽性和陰性對照組DNA檢測驗證反應體系的通用性與特異性,并應用十倍倍比稀釋目標物種DNA進行方法靈敏度測試,確定方法檢出限。通過測試,牛、羊、大豆源性成分PCR檢測體系的靈敏度均為0.1 ng的模板DNA,0.1%(w/w)的模擬樣品;谷物源性、植物源性成分PCR檢測體系的靈敏度均為0.1 ng的模板DNA,0.5%(w/w)的模擬樣品。(5)市售樣品的測試。通過收集市面上的乳與乳制品進行方法驗證與樣品測試,在收集的65份樣品,其中在4份羊乳制品中檢測出牛源性成分;在5份牛乳制品中檢出植物源性成分和大豆源性成分。本研究建立了穩(wěn)定高效的乳及乳制品中牛、羊源性主成分以及可能摻假摻雜的大豆、谷物、植物成分的實時熒光PCR檢測體系。方法靈敏度高、特異性強,且可實現(xiàn)多重測試,適用于乳及乳制品真實屬性的篩查檢測。本研究所建立的方法為乳及乳制品監(jiān)管提供可靠有力的技術(shù)手段,具有重大的經(jīng)濟效益與社會效益
【關(guān)鍵詞】：乳制品 真實屬性 檢測技術(shù) 多重實時熒光PCR
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TS252.7;O657.3
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 縮略詞表10-11
• 第一章 文獻綜述11-19
• 1.1 我國乳及乳制品市場概述11-13
• 1.2 乳及乳制品摻假摻雜檢測技術(shù)研究進展13-16
• 1.2.1 傳統(tǒng)檢測方法在乳及乳制品摻假摻雜檢測中的應用研究13
• 1.2.2 近紅外光譜檢測技術(shù)13-14
• 1.2.3 高效液相色譜技術(shù)在乳及乳制品摻假摻雜檢測中的應用研究14
• 1.2.4 酶聯(lián)免疫技術(shù)在乳及乳制品摻假摻雜檢測中的應用研究14-15
• 1.2.5 實時熒光PCR技術(shù)在乳及乳制品摻假摻雜檢測中的應用研究15-16
• 1.3 本論文研究的內(nèi)容和意義16-19
• 第二章 乳及乳制品實時熒光PCR檢測方法建立19-34
• 2.1 材料與方法19-25
• 2.1.1 實驗材料、試劑與儀器19-20
• 2.1.2 方法20-25
• 2.2 結(jié)果25-31
• 2.2.1 不同提取方法的DNA提取結(jié)果25-26
• 2.2.2 單重實時熒光PCR特異性檢測結(jié)果26-31
• 2.3 討論31-34
• 2.3.1 三種DNA提取方法的分析比較31-33
• 2.3.2 單重實時熒光PCR檢測體系的建立33-34
• 第三章 乳及乳制品多重實時熒光PCR檢測方法建立34-46
• 3.1 材料與方法34-38
• 3.1.1 實驗材料、試劑及設(shè)備同第二章；34
• 3.1.2 多重實時熒光PCR反應體系的建立及優(yōu)化34-38
• 3.2 結(jié)果38-44
• 3.2.1 雙重實時熒光PCR檢測結(jié)果38-42
• 3.2.2 三重實時熒光PCR檢測結(jié)果42-44
• 3.3 討論44-46
• 第四章 方法靈敏度實驗以及市售乳制品檢測情況46-59
• 4.1 材料與方法46-47
• 4.1.1 實驗材料、試劑與設(shè)備46
• 4.1.2 方法46-47
• 4.2 結(jié)果47-57
• 4.2.1 方法靈敏度測試結(jié)果47-50
• 4.2.2 模擬混合樣品檢出限實驗50-53
• 4.2.3 市售羊乳制品樣品測試結(jié)果53-57
• 4.3 討論57-59
• 結(jié)論與展望59-62
• 參考文獻62-65
• 攻讀碩士學位期間取得的研究成果65-66
• 致謝66-67
• 附件67

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