本文關(guān)鍵詞：免疫層析快速檢測呋喃唑酮代謝物的方法研究

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【摘要】：免疫層析試紙條具有特異性強、靈敏度高、方法簡捷、分析容量大、檢測成本低等優(yōu)點,定性檢測不需要儀器輔助,且樣品前處理步驟簡單方便,非常適合現(xiàn)場檢測,并且可以提供系列化的產(chǎn)品以及技術(shù)產(chǎn)品可以商業(yè)化,不僅為檢測行業(yè)提供幫助,并能為社會創(chuàng)造經(jīng)濟價值。本課題研究設(shè)計了兩種免疫層析快速檢測試紙條,分別用金磁復合微粒和CdTe量子點代替膠體金標記AOZ單抗,結(jié)合了納米標記技術(shù)與免疫層析技術(shù),通過金磁微球標記和CdTe QDs熒光標記抗體,與同等膠體金標記相比,提高了靈敏度,在定性分析中,前者可直接通過裸眼判斷,后者通過便攜式紫外燈照射,在定量分析中,前者可通過磁性號分析儀,后者通過熒光讀數(shù)儀可分別讀取層析載體上三維的磁性號和熒光信號,直接得到信號值,通過建立標準曲線,定量檢測值。本課題中制備了粒徑均一、分散性好的多層金磁復合微粒,并成功與AOZ單克隆抗體進行偶聯(lián),探索到最佳偶聯(lián)條件為:pH為7.4的環(huán)境下,1 mg金磁復合微粒表面偶聯(lián)AOZ-Mc Ab的最佳含量為170μg,投入抗體含量480μg,偶聯(lián)率為35.43%,用含5%BSA,pH=7.4的Pbs的封閉劑封閉50 min,最后探針保存于含0.2%BSA、2%蔗糖、0.8%Triton-X-100、0.05%PVP、0.2%Tween-20、0.02%NaN3的Pbs中�？蔀槠渌贵w的磁微粒標記提供參考。并對層析墊上材料進行了優(yōu)選,包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結(jié)合墊,分別選用Satorius CN140、GL-b02、Ahlstrom8964;并對樣品墊及結(jié)合墊處理液進行了探究實驗,分別將含0.5%BSA、2%曲拉通、0.2%NaCl、2%PVP的超純水溶液作為最佳樣品墊處理液及含1%蔗糖、0.2%曲拉通、0.2%Tween-20的超純水溶液作為最佳結(jié)合墊處理液;將以上所得物成功組裝成AOZ金磁免疫層析試紙條,并對該試紙條的性能進行了評估,該試紙條靈敏度為8 ng/mL,與硝基呋喃類代謝物無交叉反應,特異性較好、重復性佳,常溫保存一年,4℃可保存長達2年,穩(wěn)定性優(yōu)良。本課題中制備了粒徑均一、分散性好,量子產(chǎn)率高達42.3%的高量子產(chǎn)率熒光CdTe QDs,具有良好的光譜性能的可作為標記抗體的優(yōu)良熒光材料;優(yōu)選了量子點溶液的純化方案,即丙酮沉淀法優(yōu)于透析純化,對量子點的處理具有較高的參考價值;對熒光探針的偶聯(lián)條件進行了優(yōu)化,選擇反應50 min作為CdTeAOZ-Mc Ab探針的最佳偶聯(lián)時間及AOZ-Mc Ab最佳使用量為QDs與AOZ-Mc Ab之比為1:0.75。得到具有優(yōu)良光譜性能的熒光探針,為其他熒光材料標記抗體提供可行性偶聯(lián)方法參考;對層析墊上材料進行了優(yōu)選,包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結(jié)合墊,分別選用Millipore 135、GL-b02、Ahlstrom8964。在以上條件下成功制得AOZ熒光免疫層析試紙條,并對該試紙條的性能進行了評估,靈敏度為5 ng/mL,與硝基呋喃類代謝物沒有交叉反應,特異性較好、重復性及穩(wěn)定性優(yōu)良。作為以上兩種試紙條的對比,本研究制備了AOZ金標試紙條。采用最佳試紙條材料及處理方法處理后組裝成AOZ金標試紙條,靈敏度為10 ng/mL,性能檢測優(yōu)良。通過該試紙條的制作,進一步證明了本研究的磁性試紙條和熒光試紙條具有靈敏度高的優(yōu)點,通過儀器輔助后試紙條的靈敏度可增加1-2個數(shù)量級,遠遠超過市場上已有產(chǎn)品的檢測限,不僅可彌補金標試紙條的缺陷,也為新型試紙條的研制奠定基礎(chǔ),具有較大的研究意義和開發(fā)價值。
【關(guān)鍵詞】：Fe3O4/Au CdTe 金磁探針 熒光探針 呋喃唑酮代謝物 試紙條
【學位授予單位】：上海師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：O652
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 主要符號表9-10
• 第1章 緒論10-21
• 1.1 呋喃唑酮及其代謝物的的理化性質(zhì)10-11
• 1.2 呋喃唑酮對食品的污染及殘留限量11
• 1.3 呋喃唑酮殘留檢測方法11-13
• 1.3.1 高效液相色譜法12
• 1.3.2 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)12
• 1.3.3 免疫分析法12-13
• 1.4 免疫層析技術(shù)13-14
• 1.4.1 免疫層析相關(guān)納米粒子13-14
• 1.4.2 基于納米粒子的檢測14
• 1.4.3 膠體金免疫層析技術(shù)14
• 1.5 磁性免疫層析技術(shù)14-16
• 1.6 熒光免疫層析技術(shù)16-19
• 1.6.1 熒光量子點應用研究進展17
• 1.6.2 作為生物探針的量子點17-18
• 1.6.3 量子點免疫檢測技術(shù)18-19
• 1.7 本課題的研究目的和主要內(nèi)容19-21
• 1.7.1 研究目的19-20
• 1.7.2 主要內(nèi)容20-21
• 第2章 AOZ金磁免疫層析試紙條21-37
• 2.1 實驗材料與儀器21-22
• 2.1.1 實驗材料22
• 2.1.2 實驗儀器22
• 2.2 實驗方法22-29
• 2.2.1 多層復合金磁納米顆粒（Fe3O4/Au）的制備22-23
• 2.2.2 金磁-AOZ-McAb探針的制備及條件的優(yōu)化23-25
• 2.2.3 AOZ金磁免疫層析試紙條的組裝及組裝材料優(yōu)選25-28
• 2.2.4 AOZ的衍生化28
• 2.2.5 AOZ金磁免疫層析試紙條的性能評價28-29
• 2.3 實驗結(jié)果與分析29-36
• 2.3.1 多層復合金磁納米顆粒（Fe3O4/Au）的鑒定29-30
• 2.3.2 金磁-AOZ-McAb探針制備的條件優(yōu)化30-33
• 2.3.3 AOZ金磁免疫層析試紙條的組裝33-34
• 2.3.4 AOZ金磁免疫層析試紙條的性能評價34-36
• 2.4 本章小結(jié)36-37
• 第3章 AOZ熒光免疫層析試紙條37-53
• 3.1 實驗材料與儀器37-38
• 3.1.1 實驗材料37-38
• 3.1.2 實驗儀器38
• 3.2 實驗方法38-43
• 3.2.1 CdTe熒光量子點的制備及純化38-39
• 3.2.2 CdTe -AOZ-McAb探針的制備及偶聯(lián)條件優(yōu)化39-40
• 3.2.3 AOZ熒光免疫層析試紙條的組裝及組裝條件優(yōu)化40-42
• 3.2.4 AOZ熒光試紙條性能測試42-43
• 3.2.5 AOZ金標試紙條的研制43
• 3.3 實驗結(jié)果與分析43-52
• 3.3.1 CdTe熒光量子點的鑒定43-46
• 3.3.3 CdTe -AOZ-McAb探針的制備46-48
• 3.3.4 AOZ熒光免疫層析試紙條的組裝及組裝條件優(yōu)化48-50
• 3.3.5 AOZ熒光試紙條性能測試50-52
• 3.3.6 AOZ金標試紙條的研制52
• 3.4 本章小結(jié)52-53
• 第4章 總結(jié)與展望53-55
• 參考文獻55-62
• 攻讀碩士期間的研究成果62-63
• 致謝63-64

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