本文關(guān)鍵詞：高速逆流色譜法分離純化艾葉化學(xué)成分、提取條件優(yōu)化及結(jié)構(gòu)鑒定

  更多相關(guān)文章： 艾葉 響應(yīng)面法 高速逆流色譜法 分離純化

【摘要】：目的:通過單因素試驗、正交法、響應(yīng)面法優(yōu)化艾葉總黃酮的提取條件,并采用制備型HSCCC分離純化艾葉中的化學(xué)成分,建立超聲波輔助提取做前期提取—溶劑萃取做預(yù)純化—HSCCC做分離純化—UV、HPLC、LCMS-IT-TOF、1H-NMR做最終分析鑒定的技術(shù)流程,為艾葉進(jìn)一步的藥理活性及臨床研究提供技術(shù)支持,為其他中藥及天然產(chǎn)物中化合物的分離純化提供技術(shù)依據(jù)。方法:(1)以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,采用Na NO2-Al(NO3)3-Na OH比色法對黃酮進(jìn)行顯色,用紫外分光光度法測定艾葉中總黃酮的含量并進(jìn)行方法學(xué)驗證。(2)以總黃酮提取率為指標(biāo),選取甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮四種溶劑對艾葉進(jìn)行提取,篩選出艾葉總黃酮的最佳提取溶劑。(3)以總黃酮提取率為指標(biāo),采用浸提法、回流提取法、超聲波提取法對艾葉進(jìn)行提取,篩選出艾葉總黃酮的最佳提取方法。(4)選取提取時間、提取溫度、料液比和體積分?jǐn)?shù)四個因素在各水平下進(jìn)行單因素實驗,確定單因素下的最佳提取條件。(5)選取四因素三水平,以總黃酮提取率為指標(biāo),采用正交法對艾葉總黃酮提取條件進(jìn)行優(yōu)化,得出正交法的最佳提取條件。(6)選取四因素三水平,以總黃酮提取率為指標(biāo),采用響應(yīng)面法對艾葉總黃酮提取條件進(jìn)行優(yōu)化,得出響應(yīng)面法的最佳提取條件。(7)確定HPLC分離艾葉化學(xué)成分的條件,通過HPLC測定艾葉化學(xué)成分在各溶劑體系中的K,篩選HSCCC最佳溶劑體系。(8)采用制備型HSCCC分離純化艾葉中的化學(xué)成分,通過HPLC檢測得到符合純度要求的各單體化合物。(9)通過UV、HPLC、LCMS-IT-TOF、1H-NMR對化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定并計算產(chǎn)率。結(jié)果:(1)建立了紫外分光光度法測定艾葉總黃酮含量的方法且方法學(xué)考察結(jié)果良好。(2)甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮對艾葉總黃酮的提取率分別為4.3%、4.08%、2.42%、1.79%,所以本實驗采用甲醇作為艾葉總黃酮的最佳提取溶劑。(3)浸提法、回流提取法、超聲波提取法對艾葉總黃酮的提取率分別為1.12%、4.01%、4.63%,所以本實驗采用超聲波提取法作為艾葉總黃酮的最佳提取方法。(4)單因素實驗下的最佳提取條件為提取時間30min、提取溫度70℃、料液比1:40、甲醇體積分?jǐn)?shù)60%,總黃酮提取率為4.29%。(5)正交實驗法的最佳提取條件為提取時間40min、提取溫度80℃、料液比1:30、甲醇體積分?jǐn)?shù)70%,總黃酮提取率為4.85%。(6)響應(yīng)面法的最佳提取條件為提取時間46 min、提取溫度74℃、料液比1:42,甲醇體積分?jǐn)?shù)66%,總黃酮提取率為6.85%。(7)HPLC法分離艾葉化學(xué)成分的條件為柱溫:25℃;流速:1.0 m L/min,流動相:A(乙腈),B(0.4%冰乙酸):0 min,10%A;10min,25%A;20 min,35%A;30 min,60%A,35min,80%A;37min,80%A;40 min,10%A;43 min,10%A,檢測波長為280nm。(8)通過K的測定,篩選出正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(3:7:4:6,v/v/v/v)為最佳兩相溶劑系統(tǒng),以上相為固定相,下相為流動相,在流速2 m L/min,轉(zhuǎn)速900 r/min,檢測波長280 nm的條件下對粗提物進(jìn)行制備分離,共得到5個單體化合物,經(jīng)HPLC檢測純度分別為98.47%,95.65%,95.48%,93.06%,98.17%。(9)一次進(jìn)樣100mg樣品得到11.0、3.6、4.1、7.5、10.3mg 5個單體化合物,產(chǎn)率分別為:11.0%、3.6%、4.1%、7.5%、10.3%;經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定5個單體化合物分別為異綠原酸A、木犀草素、矢車菊黃素、棕矢車菊素、異澤蘭黃素。結(jié)論:(1)建立了紫外分光光度法測定艾葉總黃酮的方法,該方法簡便快速,可準(zhǔn)確測定出艾葉中的總黃酮含量。(2)確定艾葉總黃酮的最佳提取溶劑為甲醇,最佳提取方法為超聲波提取法,本實驗采取這兩種方法,快速高效地提取艾葉中的總黃酮。(3)通過對比單因素試驗、正交法、響應(yīng)面法這三種條件優(yōu)化方法,確定最佳的條件優(yōu)化方法為響應(yīng)面法,本實驗采用響應(yīng)面法優(yōu)化艾葉總黃酮的提取條件,經(jīng)濟高效地提取艾葉中的總黃酮。(4)確定了HPLC分離艾葉化學(xué)成分的條件,分離時間短且分析效果好。(5)本實驗首次采用HSCCC分離純化艾葉中化學(xué)成分,對艾葉中5種單體化合物進(jìn)行一步分離,該方法簡單高效,對艾葉化學(xué)成分在食品醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用具有重要意義。(6)建立了超聲波強化萃取做前期提取-溶劑萃取做預(yù)純化-HSCCC做分離純化-UV、HPLC、LCMS-IT-TOF、1H-NMR做最終分析鑒定的技術(shù)流程,為其他中藥及天然產(chǎn)物中化合物的分離純化提供技術(shù)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：艾葉 響應(yīng)面法 高速逆流色譜法 分離純化
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R284;O657.7
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 第一章 前言13-17
• 第二章 艾葉中總黃酮含量的測定17-24
• 2.1 實驗藥品、試劑與儀器17-18
• 2.2 實驗方法18-20
• 2.3 結(jié)果與分析20-23
• 2.4 小結(jié)與討論23-24
• 第三章 艾葉總黃酮提取條件的優(yōu)化24-43
• 3.1 實驗藥品、試劑與儀器24-25
• 3.2 實驗方法25-27
• 3.3 結(jié)果與分析27-41
• 3.4 小結(jié)與討論41-43
• 第四章 HSCCC分離艾葉中的化學(xué)成分43-61
• 4.1 實驗藥品、試劑與儀器43-44
• 4.2 實驗方法44-46
• 4.3 結(jié)果與分析46-59
• 4.4 小結(jié)與討論59-61
• 第五章 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定61-71
• 5.1 實驗藥品、試劑與儀器61-62
• 5.2 實驗方法62-63
• 5.3 結(jié)果與分析63-70
• 5.4 小結(jié)與討論70-71
• 第六章 結(jié)論與討論71-74
• 6.1 結(jié)論71-72
• 6.2 本論文創(chuàng)新之處72
• 6.3 展望72-74
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 附錄 1：英文縮略詞索引77-78
• 附錄 2：綜述78-88
• 參考文獻(xiàn)85-88
• 攻讀碩士學(xué)位期間的主要成果88-89
• 致謝89

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余漢謀;姜興濤;肖海鴻;代麗;;高速逆流色譜法在天然香料單離中的應(yīng)用[J];香料香精化妝品;2012年01期

2 歐霞;李勁平;佘志堅;潘陽;;高速逆流色譜法在天然藥物研究中的應(yīng)用概況[J];中南藥學(xué);2014年03期

3 袁黎明,傅若農(nóng),張?zhí)煊?鄧錦輝,李西寧;高速逆流色譜法分離茶葉中的生物堿[J];色譜;1998年04期

4 蔡定國;顧明娟;吳建均;邵茹辛;吳腈齋;李德平;;高速逆流色譜法用于甜味劑阿司帕坦的提純和雜質(zhì)鑒別[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;1993年11期

5 江和源,程啟坤,杜琪珍;高速逆流色譜法分離純化茶黃素[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2000年04期

6 許旭旭;毛政;吳斌;孫洪林;何冰芳;;高速逆流色譜法分離純化內(nèi)嗎啡肽-1[J];化工進(jìn)展;2011年09期

7 陳德經(jīng);韓豪;董博妮;;高速逆流色譜法分離純化綠原酸研究[J];食品科學(xué);2008年11期

8 石雪萍;吳亮亮;張衛(wèi)明;;高速逆流色譜法分離花椒中的黃酮化合物[J];食品科學(xué);2013年12期

9 謝貴香;王兵;梁逸曾;楊朝暉;;高速逆流色譜法對當(dāng)歸中石油醚萃取部位化學(xué)成分的分離純化[J];分析測試學(xué)報;2010年10期

10 王繼勇;何瀏;袁曉;;高速逆流色譜法純化丹酚酸B工藝研究[J];化學(xué)與生物工程;2010年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 陳蘇偉;蔡紀(jì)青;胡志浩;;高速逆流色譜法及其在中藥分離中的應(yīng)用[A];浙江省臨床合理用藥和藥劑學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

2 謝貴香;梁逸曾;王兵;楊朝暉;;高速逆流色譜法對當(dāng)歸中石油醚萃取部分的有效成分的分離純化[A];中國化學(xué)會第27屆學(xué)術(shù)年會第09分會場摘要集[C];2010年

3 朱曉娜;曹偉偉;朱金花;李明靜;;高速逆流色譜法分離制備槐花中的黃酮類化合物[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第9分會場摘要集[C];2012年

4 姜華;;高速逆流色譜法分離西蘭花籽中的硫代葡萄糖苷[A];中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會第五屆年會暨第四屆東西方食品業(yè)高層論壇論文摘要集[C];2007年

5 蔡海林;杜良偉;劉祥英;陳桂華;王彥輝;柏連陽;;高速逆流色譜法分離前胡提取物中的香豆素類功能成分[A];公共植保與綠色防控[C];2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李熹;高速逆流色譜法分離純化艾葉化學(xué)成分、提取條件優(yōu)化及結(jié)構(gòu)鑒定[D];湖南師范大學(xué);2016年

2 蘇杭;高速逆流色譜法分離微藻中活性物質(zhì)的研究[D];煙臺大學(xué);2012年

3 曹曉瑩;高速逆流色譜法對玉米須及廢次煙草有效成分的分離純化[D];北京化工大學(xué);2008年

4 王燕;高速逆流色譜法用于線蟲脂質(zhì)組學(xué)的研究[D];東北大學(xué);2011年

，

本文編號：601129