發(fā)布時(shí)間：2017-07-30 20:21

  本文關(guān)鍵詞：毛發(fā)皮質(zhì)酮為嚙齒類(lèi)動(dòng)物內(nèi)源性應(yīng)激標(biāo)記的驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 毛發(fā)皮質(zhì)酮 血液皮質(zhì)酮 腦組織皮質(zhì)酮 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 社會(huì)擊敗應(yīng)激

【摘要】：皮質(zhì)酮是由大鼠等嚙齒類(lèi)動(dòng)物的腎上腺皮質(zhì)分泌的一種糖皮質(zhì)激素。嚙齒類(lèi)動(dòng)物體內(nèi)皮質(zhì)酮與新陳代謝、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等生理功能密切相關(guān),是嚙齒類(lèi)動(dòng)物主要的應(yīng)激激素。過(guò)去的研究使用的生物標(biāo)記是血液皮質(zhì)酮、尿液皮質(zhì)酮、腦組織皮質(zhì)酮和糞便皮質(zhì)酮,這些生物標(biāo)記不能可靠地反映長(zhǎng)期慢性應(yīng)激的基礎(chǔ)水平。毛發(fā)皮質(zhì)酮可能是新型的可靠標(biāo)記,然而目前尚未有研究驗(yàn)證其可靠性。鑒于此,本研究旨在驗(yàn)證毛發(fā)皮質(zhì)酮為嚙齒類(lèi)動(dòng)物的內(nèi)源性應(yīng)激標(biāo)記。首先,本研究基于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS),選用大氣壓化學(xué)離子源正離子模式,在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式下建立了測(cè)定嚙齒類(lèi)動(dòng)物血液、毛發(fā)和腦組織皮質(zhì)酮含量的分析方法。具體方法：20 mg毛發(fā)樣本經(jīng)甲醇清洗,加內(nèi)標(biāo)溶液,于甲醇中室溫下孵育24 h,孵育液再經(jīng)C18固相萃取柱進(jìn)行提純、除雜、富集,進(jìn)入LC-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。血液樣本經(jīng)離心,取50 μl的上層血樣,加內(nèi)標(biāo)溶液,經(jīng)乙酸乙酯進(jìn)行液液萃取,N2吹干后用流動(dòng)相重新定容,進(jìn)入LC-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。20 mg的下丘腦組織和前額葉組織的預(yù)處理方法和血樣的方式一致。該方法的定量限可達(dá)到1.25 pg/mg(大鼠毛發(fā))、0.5 ng/ml(大鼠血液)、1.25 pg/mg(大鼠腦組織)和2.5 pg/mg(小鼠毛發(fā)和血液),日內(nèi)、日間變異系數(shù)均小于10%,加標(biāo)回收率在84.2%-108.0%。其次,利用該方法檢測(cè)正常大鼠、小鼠的毛發(fā)皮質(zhì)酮和血液皮質(zhì)酮的關(guān)聯(lián)性以及經(jīng)歷慢性應(yīng)激的大鼠、小鼠與正常對(duì)照組之間的皮質(zhì)酮含量差異。結(jié)果顯示,正常大鼠和小鼠的毛發(fā)皮質(zhì)酮的含量與血液皮質(zhì)酮的含量顯著正相關(guān)(ps0.05),但與前額葉和下丘腦的皮質(zhì)酮含量不相關(guān)。接受生理應(yīng)激的大鼠與社會(huì)擊敗應(yīng)激的小鼠,其毛發(fā)皮質(zhì)酮含量與血液皮質(zhì)酮含量均顯著高于正常對(duì)照組(ps0.05)。這些結(jié)果表明,毛發(fā)皮質(zhì)酮是嚙齒類(lèi)動(dòng)物的可靠的慢性應(yīng)激生物標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：毛發(fā)皮質(zhì)酮 血液皮質(zhì)酮 腦組織皮質(zhì)酮 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 社會(huì)擊敗應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q57;O657.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 緒論11-13
• 第二章 綜述13-24
• 2.1 皮質(zhì)酮的生理心理作用13-14
• 2.2 生物樣本14-15
• 2.3 現(xiàn)有的皮質(zhì)酮檢測(cè)方法15-19
• 2.3.1 熒光法15-16
• 2.3.2 免疫法16
• 2.3.3 高效液相色譜-紫外可見(jiàn)分光光度法16-17
• 2.3.4 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法17-18
• 2.3.5 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法18-19
• 2.4 現(xiàn)有研究存在的不足和問(wèn)題19-21
• 2.5 論文的研究目的、意義和內(nèi)容21-24
• 2.5.1 研究目的21
• 2.5.2 研究意義21-22
• 2.5.3 研究?jī)?nèi)容22-24
• 第三章 分析方法的建立與基質(zhì)效應(yīng)的研究24-37
• 3.1 引言24
• 3.2 實(shí)驗(yàn)24-28
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立24-25
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器25
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 3.2.4 溶劑配制26
• 3.2.5 實(shí)驗(yàn)條件26-27
• 3.2.6 空白基質(zhì)的選取及預(yù)處理27-28
• 3.2.7 基質(zhì)效應(yīng)研究28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論28-35
• 3.3.1 離子對(duì)選擇28-29
• 3.3.2 樣品和基質(zhì)加標(biāo)的色譜質(zhì)譜圖29-33
• 3.3.3 基質(zhì)效應(yīng)研究33-35
• 3.4 小結(jié)35-37
• 第四章 分析方法的驗(yàn)證37-45
• 4.1 引言37
• 4.2 實(shí)驗(yàn)37-40
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器37-38
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑38
• 4.2.3 色譜條件38
• 4.2.4 質(zhì)譜條件38
• 4.2.5 溶液的配制38-39
• 4.2.6 樣品的處理步驟39-40
• 4.3 結(jié)果和討論40-42
• 4.4 小結(jié)42-45
• 第五章 毛發(fā)皮質(zhì)酮的內(nèi)源性驗(yàn)證45-57
• 5.1 引言45
• 5.2 實(shí)驗(yàn)45-49
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器45-46
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑46
• 5.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立46-47
• 5.2.4 色譜條件47
• 5.2.5 質(zhì)譜條件47
• 5.2.6 溶液配制47
• 5.2.7 毛發(fā)、血液以及腦組織樣品的采集及預(yù)處理47-48
• 5.2.8 統(tǒng)計(jì)方法48-49
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論49-55
• 5.3.1 正常大鼠和小鼠中毛發(fā)皮質(zhì)酮和血液皮質(zhì)酮的相關(guān)性49-52
• 5.3.2 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組嚙齒類(lèi)動(dòng)物毛發(fā)皮質(zhì)酮含量的變化52-55
• 5.4 小結(jié)55-57
• 第六章 結(jié)論57-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 致謝69-71
• 作者簡(jiǎn)介71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王菊霞;張衛(wèi)國(guó);張靈菲;張小剛;麻安衛(wèi);;嚙齒動(dòng)物糞便類(lèi)固醇的分析方法及其意義[J];草業(yè)科學(xué);2015年10期

2 馬曉斐;呂品;李揮;張巖;;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定人血清中皮質(zhì)酮與皮質(zhì)醇[J];分析測(cè)試學(xué)報(bào);2013年07期

3 王U，

本文編號(hào)：595978