本文關(guān)鍵詞：毛發(fā)皮質(zhì)酮為嚙齒類動物內(nèi)源性應(yīng)激標(biāo)記的驗證

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【摘要】：皮質(zhì)酮是由大鼠等嚙齒類動物的腎上腺皮質(zhì)分泌的一種糖皮質(zhì)激素。嚙齒類動物體內(nèi)皮質(zhì)酮與新陳代謝、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等生理功能密切相關(guān),是嚙齒類動物主要的應(yīng)激激素。過去的研究使用的生物標(biāo)記是血液皮質(zhì)酮、尿液皮質(zhì)酮、腦組織皮質(zhì)酮和糞便皮質(zhì)酮,這些生物標(biāo)記不能可靠地反映長期慢性應(yīng)激的基礎(chǔ)水平。毛發(fā)皮質(zhì)酮可能是新型的可靠標(biāo)記,然而目前尚未有研究驗證其可靠性。鑒于此,本研究旨在驗證毛發(fā)皮質(zhì)酮為嚙齒類動物的內(nèi)源性應(yīng)激標(biāo)記。首先,本研究基于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS),選用大氣壓化學(xué)離子源正離子模式,在多反應(yīng)監(jiān)測方式下建立了測定嚙齒類動物血液、毛發(fā)和腦組織皮質(zhì)酮含量的分析方法。具體方法：20 mg毛發(fā)樣本經(jīng)甲醇清洗,加內(nèi)標(biāo)溶液,于甲醇中室溫下孵育24 h,孵育液再經(jīng)C18固相萃取柱進行提純、除雜、富集,進入LC-MS/MS系統(tǒng)進行測定。血液樣本經(jīng)離心,取50 μl的上層血樣,加內(nèi)標(biāo)溶液,經(jīng)乙酸乙酯進行液液萃取,N2吹干后用流動相重新定容,進入LC-MS/MS系統(tǒng)進行測定。20 mg的下丘腦組織和前額葉組織的預(yù)處理方法和血樣的方式一致。該方法的定量限可達(dá)到1.25 pg/mg(大鼠毛發(fā))、0.5 ng/ml(大鼠血液)、1.25 pg/mg(大鼠腦組織)和2.5 pg/mg(小鼠毛發(fā)和血液),日內(nèi)、日間變異系數(shù)均小于10%,加標(biāo)回收率在84.2%-108.0%。其次,利用該方法檢測正常大鼠、小鼠的毛發(fā)皮質(zhì)酮和血液皮質(zhì)酮的關(guān)聯(lián)性以及經(jīng)歷慢性應(yīng)激的大鼠、小鼠與正常對照組之間的皮質(zhì)酮含量差異。結(jié)果顯示,正常大鼠和小鼠的毛發(fā)皮質(zhì)酮的含量與血液皮質(zhì)酮的含量顯著正相關(guān)(ps0.05),但與前額葉和下丘腦的皮質(zhì)酮含量不相關(guān)。接受生理應(yīng)激的大鼠與社會擊敗應(yīng)激的小鼠,其毛發(fā)皮質(zhì)酮含量與血液皮質(zhì)酮含量均顯著高于正常對照組(ps0.05)。這些結(jié)果表明,毛發(fā)皮質(zhì)酮是嚙齒類動物的可靠的慢性應(yīng)激生物標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：毛發(fā)皮質(zhì)酮 血液皮質(zhì)酮 腦組織皮質(zhì)酮 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 社會擊敗應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q57;O657.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 第一章 緒論11-13
• 第二章 綜述13-24
• 2.1 皮質(zhì)酮的生理心理作用13-14
• 2.2 生物樣本14-15
• 2.3 現(xiàn)有的皮質(zhì)酮檢測方法15-19
• 2.3.1 熒光法15-16
• 2.3.2 免疫法16
• 2.3.3 高效液相色譜-紫外可見分光光度法16-17
• 2.3.4 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法17-18
• 2.3.5 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法18-19
• 2.4 現(xiàn)有研究存在的不足和問題19-21
• 2.5 論文的研究目的、意義和內(nèi)容21-24
• 2.5.1 研究目的21
• 2.5.2 研究意義21-22
• 2.5.3 研究內(nèi)容22-24
• 第三章 分析方法的建立與基質(zhì)效應(yīng)的研究24-37
• 3.1 引言24
• 3.2 實驗24-28
• 3.2.1 實驗動物模型的建立24-25
• 3.2.2 實驗儀器25
• 3.2.3 實驗試劑25-26
• 3.2.4 溶劑配制26
• 3.2.5 實驗條件26-27
• 3.2.6 空白基質(zhì)的選取及預(yù)處理27-28
• 3.2.7 基質(zhì)效應(yīng)研究28
• 3.3 實驗結(jié)果與討論28-35
• 3.3.1 離子對選擇28-29
• 3.3.2 樣品和基質(zhì)加標(biāo)的色譜質(zhì)譜圖29-33
• 3.3.3 基質(zhì)效應(yīng)研究33-35
• 3.4 小結(jié)35-37
• 第四章 分析方法的驗證37-45
• 4.1 引言37
• 4.2 實驗37-40
• 4.2.1 實驗儀器37-38
• 4.2.2 實驗試劑38
• 4.2.3 色譜條件38
• 4.2.4 質(zhì)譜條件38
• 4.2.5 溶液的配制38-39
• 4.2.6 樣品的處理步驟39-40
• 4.3 結(jié)果和討論40-42
• 4.4 小結(jié)42-45
• 第五章 毛發(fā)皮質(zhì)酮的內(nèi)源性驗證45-57
• 5.1 引言45
• 5.2 實驗45-49
• 5.2.1 實驗儀器45-46
• 5.2.2 實驗試劑46
• 5.2.3 實驗動物模型的建立46-47
• 5.2.4 色譜條件47
• 5.2.5 質(zhì)譜條件47
• 5.2.6 溶液配制47
• 5.2.7 毛發(fā)、血液以及腦組織樣品的采集及預(yù)處理47-48
• 5.2.8 統(tǒng)計方法48-49
• 5.3 實驗結(jié)果和討論49-55
• 5.3.1 正常大鼠和小鼠中毛發(fā)皮質(zhì)酮和血液皮質(zhì)酮的相關(guān)性49-52
• 5.3.2 實驗組與對照組嚙齒類動物毛發(fā)皮質(zhì)酮含量的變化52-55
• 5.4 小結(jié)55-57
• 第六章 結(jié)論57-60
• 參考文獻(xiàn)60-69
• 致謝69-71
• 作者簡介71

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王菊霞;張衛(wèi)國;張靈菲;張小剛;麻安衛(wèi);;嚙齒動物糞便類固醇的分析方法及其意義[J];草業(yè)科學(xué);2015年10期

2 馬曉斐;呂品;李揮;張巖;;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定人血清中皮質(zhì)酮與皮質(zhì)醇[J];分析測試學(xué)報;2013年07期

3 王U，

本文編號：595978