發(fā)布時間：2017-07-13 19:06

  本文關鍵詞：基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的腫瘤相關生物分子的檢測

  更多相關文章： G-四鏈體 腫瘤 分子刷型共軛聚合物 熒光共振能量轉(zhuǎn)移 金納米顆粒 熒光-比色傳感器

【摘要】：腫瘤(tumor)是機體在各種致瘤因子作用下,局部組織細胞異常增生所形成的新生物。目前,按照腫瘤對人體危害的大小及新生物的細胞特征,將其分為良性和惡性。惡性腫瘤生長迅速,容易全身轉(zhuǎn)移,通過手術(shù)治療后的復發(fā)概率較高,是危害人類健康最嚴重的一類疾病。所以,臨床上對于腫瘤的檢測、監(jiān)測和治療顯得格外重要。本課題通過利用分子刷型共軛聚合物、硫黃素T和金納米顆粒的特殊光學性能,建立了穩(wěn)定性好,特異性高,靈敏度低的檢測腫瘤相關生物分子的光學生物傳感器。首先,以分子刷型共軛聚合物(ThNI)/核酸適體(apt29)/ThT復合物作為研究體系,設計了一種基于ThNI和ThT的熒光共振能量轉(zhuǎn)移傳感機制,應用于凝血酶檢測的傳感策略中。凝血酶能夠誘導富G的核酸適體形成G-四鏈體,由于凝血酶較大的空間位阻會阻礙ThT的嵌入,與不加凝血酶時對比,FRET效率顯著降低,從而可實現(xiàn)對凝血酶的檢測。該傳感器在緩沖溶液和10%血清環(huán)境中對于凝血酶的最低檢出限都為0.2 nM。其次,以ThT作為熒光信號傳感材料,以AuNPs為比色信號傳感材料,利用ThT可誘導富G核酸序列形成G-四鏈體并嵌入其中發(fā)光的特性,構(gòu)建了一種檢測腫瘤相關DNA分子(富G核酸序列)的熒光-比色傳感器。因為ThT能夠誘導富G核酸序列形成G-四鏈體,導致DNA的構(gòu)型發(fā)生變化,脫離金納米顆粒表面,加入鹽后金納米顆粒聚集且顏色發(fā)生變化。該傳感器可在靶物質(zhì)濃度為5 nM-300 nM的小范圍內(nèi)實現(xiàn)對富G核酸序列的檢測,檢測限為5 nM。最后,將AuNPs引入到腫瘤標志物(PSA)的檢測中,利用其對多肽的物理吸附作用和多肽片段被切割而引起的聚集現(xiàn)象,構(gòu)建了一種基于能量轉(zhuǎn)移的“turn-on”型熒光-比色傳感器。當有PSA存在時,PSA會特異性酶切熒光標記的多肽,小的寡肽片段與金納米顆粒之間的作用較弱,不能像“橋梁”一樣拉近金納米顆粒之間的距離,所以多肽熒光恢復,金納米溶液顏色不變。此傳感器對緩沖溶液中PSA的最低檢測限為0.01 nM,對10%血清環(huán)境中PSA檢測限為0.05 nM。
【關鍵詞】：G-四鏈體 腫瘤 分子刷型共軛聚合物 熒光共振能量轉(zhuǎn)移 金納米顆粒 熒光-比色傳感器
【學位授予單位】：南京郵電大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.4;O657.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 專用術(shù)語注釋表9-10
• 第一章 緒論10-27
• 1.1 生物傳感器概述10-19
• 1.1.1 熒光生物傳感器11-16
• 1.1.2 比色生物傳感器16-17
• 1.1.3 熒光-比色生物傳感器17-19
• 1.2 分子刷型共軛聚合物及其生物傳感器19-21
• 1.2.1 分子刷型共軛聚合物的簡述19
• 1.2.2 基于分子刷型共軛聚合物的生物傳感器19-21
• 1.3 硫黃素T及其生物傳感器21-23
• 1.3.1 硫黃素T的簡述21
• 1.3.2 基于硫黃素T的生物傳感器21-23
• 1.4 金納米顆粒及其生物傳感器23-25
• 1.4.1 金納米顆粒的簡述23
• 1.4.2 基于金納米顆粒的生物傳感器23-25
• 1.5 本課題的設計思路與意義25-27
• 第二章 基于G-四鏈體探針和分子刷型共軛聚合物的凝血酶檢測27-36
• 2.1 引言27-28
• 2.2 傳感策略28-29
• 2.3 實驗部分29-31
• 2.3.1 實驗材料29
• 2.3.2 儀器與方法29-30
• 2.3.3 實驗過程30-31
• 2.4 結(jié)果與討論31-35
• 2.4.1 可行性分析31-32
• 2.4.2 特異性分析32-33
• 2.4.3 靈敏度分析33-35
• 2.5 本章小結(jié)35-36
• 第三章 基于金納米顆粒和硫黃素T的富G核酸序列檢測36-48
• 3.1 引言36
• 3.2 傳感策略36-37
• 3.3 實驗部分37-40
• 3.3.1 實驗材料37-38
• 3.3.2 儀器與方法38
• 3.3.3 實驗過程38-40
• 3.4 結(jié)果與討論40-47
• 3.4.1 可行性分析40-41
• 3.4.2 反應條件優(yōu)化分析41-42
• 3.4.3 靈敏度分析42-43
• 3.4.4 實驗方案的應用分析43-47
• 3.5 本章小結(jié)47-48
• 第四章 基于金納米顆粒和多肽的前列腺特異性抗原檢測48-59
• 4.1 引言48
• 4.2 傳感策略48-49
• 4.3 實驗部分49-52
• 4.3.1 實驗材料49-50
• 4.3.2 儀器與方法50
• 4.3.3 實驗過程50-52
• 4.4 結(jié)果與討論52-58
• 4.4.1 可行性分析52-53
• 4.4.2 反應條件優(yōu)化53-55
• 4.4.3 特異性分析55-56
• 4.4.4 靈敏度分析56-58
• 4.5 本章小結(jié)58-59
• 第五章 總結(jié)與展望59-61
• 參考文獻61-68
• 附錄1 攻讀碩士學位期間撰寫的論文68-69
• 附錄2 攻讀碩士學位期間申請的專利69-70
• 附錄3 攻讀碩士學位期間參加的科研項目70-71
• 致謝71

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本文編號：538035