本文關鍵詞：用于擬干酪乳桿菌代謝組學分析的樣品處理方法研究和應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：用氣相色譜-質譜聯(lián)用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GC-MS)技術建立了用于檢測擬干酪乳桿菌胞內代謝物的代謝組學研究方法�？疾炝瞬煌芙鈩�(吡啶、四氫呋喃、甲氧胺鹽酸鹽)和衍生化試劑(N-甲基叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺、N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰+三甲基氯硅烷和N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺),對質譜峰的信號強度和個數(shù)的影響,確定使用吡啶作為溶解劑、N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰+三甲基氯硅烷作為衍生劑的兩步衍生法效果最佳。以擬干酪乳桿菌為分析對象,共鑒定出49種胞內中間代謝物。方法學考察結果表明,該方法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。此外,還采用主成分分析方法對所獲得的擬干酪乳桿菌發(fā)酵過程胞內代謝產物變化數(shù)據(jù)進行了代謝模式識別研究。 本文建立了一個用于擬干酪乳桿菌代謝組學研究的樣品滅活和萃取方法。使用單元和多元數(shù)據(jù)分析方法,分析了不同滅活方法(60%甲醇、60%甲醇/0.9%碳酸銨(pH6.0)、60%甲醇/0.9%氯化鈉、40%乙醇/0.9%氯化鈉和60%甘油/1.35%氯化鈉)和萃取方法(100%甲醇,70%甲醇,甲醇/氯仿,乙腈/甲醇/水,連續(xù)萃取)作用效果。研究結果表明發(fā)現(xiàn)60%甲醇/0.9%氯化鈉滅活效率最高并且能夠有效降低胞內代謝物滲出,是最適合的滅活方法。此外,建立了連續(xù)萃取方法,先使用70%甲醇萃取然后再使用乙腈/甲醇/水萃取,此萃取方法的萃取效率最高且重復性好。 此外,本文將建立的GC-MS分析方法和代謝組學研究的樣品處理方法成功用于分析擬干酪乳桿菌發(fā)酵生產乳酸過程中的代謝變化。乳酸發(fā)酵過程隨著發(fā)酵進行,菌體進入穩(wěn)定期后,溶氧往往出現(xiàn)回升現(xiàn)象,同時乳酸產率和得率都有一定程度的下降。采集溶氧(Dissolved Oxygen, DO)回升前后發(fā)酵樣品進行代謝物組分析,并采用主成分分析法(Principal Component Analysis, PCA)對所獲得的代謝物組數(shù)據(jù)進行模式識別。分析結果表明,發(fā)酵過程中伴隨著DO回升,大多數(shù)胞內代謝物濃度隨時間變化發(fā)生顯著性差異,主要是EMP途徑和TCA循環(huán)中間代謝物出現(xiàn)大量積累,擬干酪乳桿菌代謝輪廓也呈現(xiàn)出一定規(guī)律的變化。因此發(fā)酵代謝途徑的遷移是造成DO回升后乳酸產率和得率下降的原因。
【關鍵詞】：擬干酪乳桿菌 滅活方法 萃取方法 代謝組學 發(fā)酵
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：Q936;O658
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-21
• 1.1 乳酸的性質及其用途10
• 1.1.1 乳酸性質10
• 1.1.2 乳酸及其衍生物的用途10
• 1.2 代謝組學定義10-12
• 1.3 代謝組學的應用12-13
• 1.4 代謝組學的分析流程13-14
• 1.5 微生物代謝組學生物實驗14-16
• 1.5.1 終止微生物代謝14-15
• 1.5.2 滅活劑滅活效率的判定15
• 1.5.3 萃取胞內代謝物15-16
• 1.6 代謝組學研究儀器分析技術16-19
• 1.6.1 核磁共振16
• 1.6.2 氣相色譜-質譜聯(lián)用儀16-18
• 1.6.3 液相色譜-質譜聯(lián)用技術18
• 1.6.4 其他質譜技術18-19
• 1.7 定量擬干酪乳桿菌代謝組方法的目的和意義19-20
• 1.8 研究內容20-21
• 第2章 材料和方法21-27
• 2.1 實驗材料21-25
• 2.1.1 菌種21
• 2.1.2 儀器21-22
• 2.1.3 試劑22-24
• 2.1.4 培養(yǎng)基配方24-25
• 2.1.5 培養(yǎng)方法25
• 2.2 分析和測定方法25-27
• 2.2.1 pH測定25-26
• 2.2.2 菌體密度測定26
• 2.2.3 發(fā)酵液中葡萄糖濃度的測定26
• 2.2.4 乳酸測定26
• 2.2.5 GC-MS分析方法26
• 2.2.6 細胞滅活方法和代謝物萃取方法26-27
• 第3章 GC-MS樣品衍生方法建立27-36
• 3.1 引言27
• 3.2 實驗方法27-28
• 3.2.1 GC-MS樣品衍生方法27-28
• 3.2.2 色譜質譜條件28
• 3.2.3 代謝物鑒定28
• 3.3 實驗結果與討論28-35
• 3.3.1 不同溶解劑比較28-29
• 3.3.2 不同衍生劑比較29-32
• 3.3.3 一步衍生法和兩步衍生法比較32
• 3.3.4 內標的選擇32-33
• 3.3.5 代謝物譜分析與物質鑒定33
• 3.3.6 GC-MS分析方法學考察33-35
• 3.4 本章小結35-36
• 第4章 用于擬乳酪桿菌代謝組學研究的取樣滅活和萃取方法研究36-51
• 4.1 引言36
• 4.2 實驗方法36-38
• 4.2.1 滅活方法36
• 4.2.2 萃取方法36-37
• 4.2.3 滅活過程中代謝物滲出實驗37
• 4.2.4 滅活效率37
• 4.2.5 胞內代謝物分析：GC-MS37
• 4.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和可視化37-38
• 4.3 實驗結果38-50
• 4.3.1 不同的滅活方法比較38-43
• 4.3.2 不同的萃取方法比較43-50
• 4.4 討論50
• 4.5 本章小結50-51
• 第5章 擬干酪乳桿菌發(fā)酵生產乳酸過程代謝輪廓變化51-60
• 5.1 引言51-52
• 5.2 實驗方法52
• 5.2.1 5L發(fā)酵罐培養(yǎng)52
• 5.3 實驗結果52-58
• 5.3.1 擬干酪乳桿菌發(fā)酵過程菌體代謝特征52-55
• 5.3.2 擬干酪乳桿菌胞內代謝物變化55-58
• 5.4 討論58-59
• 5.5 本章小結59-60
• 第6章 總結與展望60-62
• 6.1 實驗總結60
• 6.2 展望60-62
• 參考文獻62-68
• 致謝68

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 謝偉萍;丁偉祥;李孟華;;MNR在代謝組學應用[J];科技資訊;2007年16期

2 穆塔里甫·吾布利哈斯木;哈木拉提·吾甫爾;;代謝組學-生命科學研究的新平臺[J];新疆醫(yī)科大學學報;2009年05期

3 孫向明;杜娟;南莉莉;;代謝組學中代謝指紋分析技術進展[J];食品與藥品;2008年09期

4 聶存喜;張文舉;;代謝組學及其在動物營養(yǎng)研究中的應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年01期

5 ;食物:總有一款適合你[J];江西食品工業(yè);2006年01期

6 盧紅梅;梁逸曾;;代謝組學分析技術及數(shù)據(jù)處理技術[J];分析測試學報;2008年03期

7 朱超;梁瓊麟;王義明;羅國安;;代謝組學的整合化發(fā)展及其新進展[J];分析化學;2010年07期

8 許國旺;路鑫;楊勝利;;代謝組學研究進展[J];中國醫(yī)學科學院學報;2007年06期

9 ;基于超高效液相色譜與高分辨率質譜聯(lián)用的中藥代謝組學研究平臺的設計與實現(xiàn)[J];中國生物工程雜志;2010年05期

10 許廣艷;葛衛(wèi)紅;;代謝組學的數(shù)據(jù)分析技術及其應用[J];時珍國醫(yī)國藥;2011年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜永紅;虞堅爾;;代謝組學在兒科中醫(yī)藥研究中的應用與思考[A];第28次全國中醫(yī)兒科學術大會暨2011年名老中醫(yī)治療（兒科）疑難病臨床經(jīng)驗高級專修班論文匯編[C];2011年

2 趙春霞;常玉煒;Lin Dayin;陳世禮;吳澤明;許國旺;;HPLC-芯片技術在代謝組學研究方面的應用[A];第六屆海峽兩岸分析化學會議摘要論文集[C];2010年

3 王慧;侯立軍;;代謝組學技術在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的研究進展[A];第一屆長三角地區(qū)創(chuàng)傷學術會議論文匯編[C];2008年

4 周永明;任榮政;;骨髓增生異常綜合征代謝組學與骨髓增生異常綜合征[A];第八屆全國中西醫(yī)結合血液病學術會議論文集[C];2007年

5 霍玉書;;腸道代謝組學與代謝性疾病[A];中國中西醫(yī)結合學會微循環(huán)2009學術大會會議指南及論文摘要[C];2009年

6 張蕾;劉衛(wèi)紅;顏賢忠;張琪;陳合兵;;高脂血癥大鼠代謝組學特征的初步研究[A];第七屆海峽兩岸心血管科學研討會論文集[C];2009年

7 李海靜;吳勝明;李昱;方均建;馬昆鵬;宋占軍;董方霆;;代謝組學技術在糖尿病研究中的應用[A];第六屆全國化學生物學學術會議論文摘要集[C];2009年

8 李小利;李保應;高海青;馬亞兵;;代謝組學與藥物研究開發(fā)[A];山東省微量元素科學研究會第三屆學術研討會論文匯編[C];2006年

9 司端運;;代謝組學技術與藥物作用機制研究[A];全國第十一屆生化與分子藥理學學術會議論文集[C];2009年

10 劉萍;王平;陳剛;劉松林;程靜;;應用代謝組學探討中醫(yī)藥復雜理論體系的研究思路和方法[A];第十次全國中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新與發(fā)展學術交流會暨第二屆全國中醫(yī)藥博士生優(yōu)秀論文頒獎會議論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者　李雪林 實習生 楊磊;“代謝組學”助中藥走向世界[N];文匯報;2006年

2 記者　陳勇、通訊員　王占軍、蔡怡春;國際“代謝組學之父”牽手武漢[N];湖北日報;2006年

3 李雪林 楊磊;“代謝組學”助中醫(yī)藥走向世界[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 李雪林 楊磊;“代謝組學”助中醫(yī)藥走向世界[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

5 于麗珊;代謝組學與中醫(yī)藥研究受關注[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 本報實習記者　 王華鋒;合作可喜 前景可期[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 周東浩;營衛(wèi)與代謝組學[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

8 記者　劉云濤;上海：代謝組學“聯(lián)姻”中藥研究結碩果[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 記者　 徐敏;中醫(yī)藥研究中醫(yī)藥加速走向世界[N];解放日報;2006年

10 賈偉 劉平 王米渠;他山之石可以攻玉[N];中國醫(yī)藥報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林艷萍;應用基于質譜技術的代謝組學研究肝損傷標志物[D];天津大學;2009年

2 黎莉;疾病及藥物干預的代謝組學方法及應用研究[D];華東理工大學;2010年

3 夏建飛;基于液質聯(lián)用技術的代謝組學新方法的研究與應用[D];華東理工大學;2010年

4 黃海軍;肝病患者糞便上清代謝組學研究及腸道菌群對代謝的影響[D];浙江大學;2010年

5 梁曉萍;基于液質聯(lián)用的代謝組學在中藥復方療效和安全性評價中的應用[D];華東理工大學;2011年

6 黃彩華;格斗對抗性項目代謝調節(jié)與適應的核磁共振代謝組學研究[D];福建師范大學;2012年

7 李娟;運輸相關壓力對羊新陳代謝影響的代謝組學研究[D];華東師范大學;2011年

8 張惠萍;基于多種分析技術的胰腺癌與糖尿病血清代謝組學研究[D];上海交通大學;2011年

9 邵雪;基于HPLC/TripleTOF-MS/MS技術慢性乙型肝炎感染不同階段的代謝組學研究[D];吉林大學;2012年

10 沈國慶;基于動物腫瘤模型的LC-MS/MS代謝組學及藥物代謝組學方法研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李曉雪;用于擬干酪乳桿菌代謝組學分析的樣品處理方法研究和應用[D];華東理工大學;2013年

2 姚紅娟;冠心病代謝組學數(shù)據(jù)的處理與分析[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

3 牟紅元;基于質譜信號的正交投影方法及其在中藥代謝組學研究中的應用[D];蘇州大學;2012年

4 余欣尉;加壓毛細管電色譜—質譜聯(lián)用平臺的搭建與應用及細胞代謝組學研究[D];上海交通大學;2013年

5 高翠紅;肝細胞肝癌患者尿液的代謝組學研究[D];天津醫(yī)科大學;2011年

6 毛璇;代謝組學技術在疾病動物模型研究中的應用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2010年

7 馮偉峰;基于代謝組學對代謝綜合征特征代謝物及其中醫(yī)證型的研究[D];暨南大學;2010年

8 劉娟;肝癌以及功能性消化不良患者的代謝組學研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

9 李常曉;兒童感染性肝損傷的血清代謝組學初步研究[D];吉林大學;2012年

10 許梅燕;添加色素在雞及其產品中代謝組學的GC-MS分析研究[D];長春理工大學;2012年

  本文關鍵詞：用于擬干酪乳桿菌代謝組學分析的樣品處理方法研究和應用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：443784