本文關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳在生物樣品分離分析中的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：毛細(xì)管電泳(CE)作為一種較新的微分離技術(shù),具有快速簡便、分離效率高、試劑消耗量少和靈敏度高等特點,廣泛用于醫(yī)學(xué)、環(huán)境和食品等復(fù)雜樣品的分離分析。激光誘導(dǎo)熒光檢測(LIF)是毛細(xì)管電泳最靈敏的檢測方法之一,非常適合于復(fù)雜樣品中的痕量組分分析。目前,CE-LIF常用于本身具有熒光性能或易被熒光試劑標(biāo)記和染色的物質(zhì)測定,但傳統(tǒng)的熒光探針種類少,標(biāo)記時間長。量子點作為一種新型的熒光探針,具有獨特的光化學(xué)特性,如寬的激發(fā)光譜、窄的發(fā)射譜帶、不易漂白和極好的光穩(wěn)定性等,在生命分析化學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域顯示出廣闊的應(yīng)用前景。生物樣品具有樣品量少、待測組分含量低、基質(zhì)復(fù)雜等特點,實現(xiàn)生物樣品中痕量組分的快速、靈敏檢測,是分析工作者面臨的巨大挑戰(zhàn)。因此,開展生物樣品中痕量組分分析方面的應(yīng)用研究,建立復(fù)雜基質(zhì)中目標(biāo)分子的靈敏檢測方法,具有重要的意義。 該論文在綜述前人工作的基礎(chǔ)上,主要開展了以下研究工作： (1)建立了一種同時分離測定魚血液中皮質(zhì)醇、雌二醇及睪酮含量的膠束電動色譜法。研究了緩沖溶液濃度、添加劑含量、pH、分離電壓及溫度對分離的影響,得到了最佳分離條件。即運行緩沖溶液為12mmol/L硼砂+60mmol/L SDS+6mmol/L β-CD+8%(v/v)乙腈,pH9.5,檢測波長225nm,分離電壓25kV,分離溫度25℃的條件下,采用毛細(xì)管短端進(jìn)樣(毛細(xì)管有效長度10cm),反向分離的模式,三種類固醇激素在4min內(nèi)達(dá)到基線分離。且分析物在1.0～100.0μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(相關(guān)系數(shù)0.9932)。該法用于魚血液中類固醇激素的檢測,回收率為84.60～113.30%,滿足生物樣品檢測要求。 (2)以谷胱甘肽(GSH)為穩(wěn)定劑合成了水溶性CdTe QDs,建立了一種量子點-溶菌酶共軛物分離分析的毛細(xì)管電泳新方法。以EDC(碳二亞胺鹽酸鹽)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)為連接劑,將QDs與溶菌酶進(jìn)行生物偶聯(lián),探討了偶聯(lián)劑用量、緩沖溶液類型及pH對偶聯(lián)效果的影響,得到了最佳偶聯(lián)條件：50mmol/L KH2PO4-Na2HPO4, pH7.4,20μL2.8×10-3mol/L CdTe,30μL25mg/mL EDC,30μL1.5mg/mL NHS,40μL1mg/mL溶菌酶。在最佳毛細(xì)管電泳分離條件(即10mmol/L硼砂,pH9.25,分離電壓20kV,溫度25℃)下,GSH-CdTe QDs及其溶菌酶共軛物能有效分離。該法可用于生物樣品中痕量溶菌酶的標(biāo)記檢測。 (3)利用合成QDs的優(yōu)異熒光性能,以GSH-CdTe QDs作為熒光探針,建立了快速、靈敏測定人血清中二羥丙茶堿(DPP)含量的熒光分析法�？疾炝薌SH-CdTe QDs在不同類型緩沖溶液及不同溫度下的熒光強(qiáng)度,探討了緩沖溶液pH,反應(yīng)時間,加入次序,干擾離子等因素對GSH-CdTe QDs-DPP體系熒光強(qiáng)度的影響,得到最佳實驗條件,即50mmol/L KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液,pH8.4,2℃下反應(yīng)8分鐘。在最佳實驗條件下,固定QDs濃度為2.8×10-6mol/L, DPP在1.67×10-6～1.33×10-5mol/L范圍內(nèi)時,F0/F與DPP濃度呈良好線性關(guān)系(相關(guān)系數(shù)為0.9970),檢出限2.24×10-7mol/L,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.05%(n=3)。將該法成功用于人血清中DPP的測定,回收率為87.41～117.94%,結(jié)果滿意。此外,初步探討了DPP的加入引起GSH-CdTe QDs熒光猝滅的反應(yīng)機(jī)理。
【關(guān)鍵詞】：毛細(xì)管電泳 類固醇激素 量子點 熒光探針
【學(xué)位授予單位】：浙江師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：O658.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 1 緒論12-30
• 1.1 毛細(xì)管電泳概述12-19
• 1.1.1 毛細(xì)管電泳的基本裝置12-13
• 1.1.2 毛細(xì)管電泳的特點13-14
• 1.1.3 CE基本分離模式和原理14-17
• 1.1.3.1 毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)14-15
• 1.1.3.2 膠束電動毛細(xì)管色譜(MECC)15-16
• 1.1.3.3 毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)16
• 1.1.3.4 毛細(xì)管等電聚焦(CIEF)16-17
• 1.1.3.5 毛細(xì)管等速電泳(CITP)17
• 1.1.4 毛細(xì)管電泳檢測器17-19
• 1.1.4.1 紫外-可見吸收檢測18
• 1.1.4.2 激光誘導(dǎo)熒光檢測18
• 1.1.4.3 電化學(xué)檢測18-19
• 1.1.4.4 質(zhì)譜檢測19
• 1.1.4.5 化學(xué)發(fā)光檢測器19
• 1.2 毛細(xì)管電泳的應(yīng)用19-21
• 1.2.1 毛細(xì)管電泳在量子點分析中的應(yīng)用19-20
• 1.2.2 毛細(xì)管電泳在生物樣品分析中的應(yīng)用20-21
• 1.2.3 毛細(xì)管電泳在農(nóng)藥分析中的應(yīng)用21
• 1.3 量子點概述21-24
• 1.3.1 量子點的特點22-23
• 1.3.2 量子點的表征23-24
• 1.3.2.1 透射電子顯微鏡法23
• 1.3.2.2 紅外吸收光譜法23
• 1.3.2.3 紫外可見吸收光譜法23-24
• 1.3.2.4 熒光光譜法24
• 1.4 量子點的應(yīng)用24-29
• 1.4.1 無機(jī)離子檢測24-25
• 1.4.2 藥物檢測25-26
• 1.4.3 蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的標(biāo)記26-27
• 1.4.4 生物組織和細(xì)胞的標(biāo)記27-28
• 1.4.5 用于活體成像28-29
• 1.5 課題的提出29-30
• 2 膠束電動色譜法快速測定魚血液中的類固醇激素30-40
• 2.1 引言30-31
• 2.2 實驗部分31-32
• 2.2.1 儀器和試劑31-32
• 2.2.2 樣品制備32
• 2.3 結(jié)果與討論32-39
• 2.3.1 緩沖溶液濃度的選擇32-33
• 2.3.2 添加劑的選擇33-35
• 2.3.2.1 β-CD對分離的影響33
• 2.3.2.2 表面活性劑(SDS)濃度對分離的影響33-34
• 2.3.2.3 乙腈(ACN)含量對分離的影響34-35
• 2.3.3 緩沖溶液pH對分離的影響35-36
• 2.3.4 分離電壓和溫度的影響36
• 2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立36-37
• 2.3.6 樣品測定37-39
• 2.4 結(jié)論39-40
• 3 GSH-CdTe量子點與溶菌酶的偶聯(lián)及其毛細(xì)管電泳分離分析研究40-52
• 3.1 引言40-41
• 3.2 實驗部分41-42
• 3.2.1 儀器和試劑41
• 3.2.2 GSH-CdTe量子點的制備和提純41-42
• 3.2.3 量子點溶菌酶共軛物的制備42
• 3.2.4 毛細(xì)管電泳儀操作42
• 3.3 結(jié)果與討論42-51
• 3.3.1 量子點表征42-45
• 3.3.1.1 量子點的紫外熒光圖譜42-44
• 3.3.1.2 量子點的紅外吸收圖譜44
• 3.3.1.3 量子點的透射電子顯微鏡圖譜44-45
• 3.3.2 量子點標(biāo)記條件的選擇45-48
• 3.3.2.1 EDC溶液濃度45-46
• 3.3.2.2 NHS溶液濃度46-47
• 3.3.2.3 緩沖溶液類型47
• 3.3.2.4 緩沖溶液pH47-48
• 3.3.3 分離條件的選擇48-51
• 3.3.3.1 緩沖溶液類型48-49
• 3.3.3.2 緩沖溶液濃度49
• 3.3.3.3 緩沖溶液pH49-50
• 3.3.3.4 分離電壓和分離溫度50-51
• 3.4 結(jié)論51-52
• 4 CdTe量子點熒光猝滅法測定人血清中的二羥丙茶堿52-62
• 4.1 引言52-53
• 4.2 實驗部分53-54
• 4.2.1 儀器與試劑53
• 4.2.2 GSH-CdTe量子點的制備和提純53
• 4.2.3 二羥丙茶堿含量的測定53-54
• 4.2.4 樣品制備54
• 4.3 結(jié)果與討論54-61
• 4.3.1 二羥丙茶堿檢測條件的優(yōu)化54-57
• 4.3.1.1 緩沖溶液的影響54-55
• 4.3.1.2 溫度的影響55
• 4.3.1.3 pH值的影響55-56
• 4.3.1.4 反應(yīng)時間的影響56-57
• 4.3.1.5 試劑加入順序的影響57
• 4.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和精密度57-58
• 4.3.3 干擾物質(zhì)對反應(yīng)體系的影響58
• 4.3.4 機(jī)理初探58-60
• 4.3.5 分析應(yīng)用60-61
• 4.4 結(jié)論61-62
• 5 結(jié)論與展望62-64
• 5.1 結(jié)論62-63
• 5.2 展望63-64
• 參考文獻(xiàn)64-75
• 致謝75-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果76-77

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳在生物樣品分離分析中的應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：413304