本文關(guān)鍵詞：雙酚A單克隆抗體制備及膠體金免疫層析試紙條的研制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雙酚A(bisphenol A,BPA)是由兩分子苯酚和一分子丙酮在酸性條件下催化縮合而成的酚類物質(zhì),其結(jié)構(gòu)與天然激素17-B雌激素及人工合成的雌激素相似,為EDCs中的一種,是已確定的外源性雌激素。雙酚A是PC的重要原料,許多日常消費品如食品包裝容器、嬰兒奶瓶等兒童用品都可能含有雙酚A,雙酚A在加熱時能析出,進入到食物和飲料當(dāng)中。近兩年來雙酚A引起了人們的高度關(guān)注。 本文通過重氮法在雙酚A中引入羧基,采用碳二亞胺法將雙酚A半抗原與牛血清白蛋白進行偶聯(lián),合成雙酚A免疫抗原,再采用混合酸酐法和卵清蛋白偶聯(lián)得到包被抗原。用免疫抗原對BALB/c鼠進行免疫,經(jīng)測定血清效價及特異性篩選有效免疫的小鼠。利用PEG法對小鼠脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進行細(xì)胞融合,篩選效價高,親合力好細(xì)胞株,經(jīng)3次有限稀釋亞克隆后建立穩(wěn)定的細(xì)胞株。通過體內(nèi)誘生腹水制備大量單克隆抗體,收集腹水并采用辛酸-硫酸銨沉淀法進行純化,SDS-PAGE和紫外分光光度法鑒定抗體純度和含量。采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金,標(biāo)記雙酚A單克隆抗體,依據(jù)免疫層析技術(shù)研制檢測雙酚A殘留的免疫層析快速檢測試紙條。 實驗結(jié)果：(1)經(jīng)紫外掃描及SDS-PAGE鑒定成功合成了雙酚A的人工免疫抗原及包被抗原,其中雙酚A分子與BSA和OVA的偶聯(lián)比分別為11：1和6.8：1。(2)獲得穩(wěn)定分泌抗雙酚A抗體的雜交瘤細(xì)胞株,該抗體屬于IgG2b亞型,輕鏈為K鏈。(3)用間接競爭ELISA檢測雙酚單克隆抗體的靈敏性,建立抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=15.851x-4.0353,線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9903,64ng/m1-8192ng/ml之間有良好的線性,半抑制濃度IC5o為2567.22ng/ml。(4)交叉反應(yīng)結(jié)果表明抗體對雙酚A具有較好的特異性,與雙酚酸的交叉率為9.6%,與其余結(jié)構(gòu)類似物的交叉率小于0.01%。(5)用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金,以金標(biāo)雙酚A單克隆抗體作為探針,將BPAH-OVA(檢測線)和羊抗鼠IgG(質(zhì)控線)分別包被在硝酸纖維素膜上,構(gòu)建了間接競爭膠體金免疫層析檢測體系(GICA)。標(biāo)記探針中金溶膠最佳粒徑為40nm,T線最佳包被抗原濃度為0.2μg/ml,C線上二抗?jié)舛葹?.2mg/ml,金標(biāo)液的最佳稀釋度為3倍稀釋。(6)GICA目測檢出限為1OOng/ml,檢測時間為10-15min。試紙條對雙酚酸、壬基酚、辛基酚等無交叉反應(yīng)。 結(jié)論：本研究制備的雙酚A單克隆抗體,特異性相對較高,雙酚A免疫層析試紙條的研制為雙酚A進行現(xiàn)場快速檢測的進一步研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 單克隆抗體 膠體金 免疫層析試紙條
【學(xué)位授予單位】：廣東工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：O621.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 目錄8-16
• ~.略詞表（Abbreviations)16-17
• 第一章 緒論17-26
• 1.1 雙酚A概述17-20
• 1.1.1 雙酚A的物理和化學(xué)性質(zhì)17-18
• 1.1.2 雙酚A的使用狀況18
• 1.1.3 雙酚A的危害性及安全性爭議18-19
• 1.1.4 雙酚A殘留的檢測19-20
• 1.2 膠體金免疫層析技術(shù)20-24
• 1.2.1 膠體金免疫層析技術(shù)的概況20-22
• 1.2.2 膠體金免疫層析技術(shù)的應(yīng)用22-24
• 1.2.3 膠體金免疫層析技術(shù)的發(fā)展趨勢24
• 1.3 本課題的意義及主要研究內(nèi)容24-26
• 1.3.1 本課題的研究意義24-25
• 1.3.2 本課題的研究思路及內(nèi)容25-26
• 第二章 雙酚A人工抗原的制備與鑒定26-37
• 2.1 材料與方法26-27
• 2.1.1 材料與試劑26-27
• 2.1.2 常用溶液體系27
• 2.1.3 實驗儀器27
• 2.2 實驗方法27-30
• 2.2.1 雙酚A免疫抗原的合成27-29
• 2.2.2 雙酣A完全抗原的鑒定29-30
• 2.3 結(jié)果與分析30-34
• 2.3.1 完全抗原的紫外掃描30-32
• 2.3.2 半抗原以及完全抗原的紅外光譜32-33
• 2.3.3 SDS-PAGE鑒定結(jié)果33-34
• 2.3.4 偶聯(lián)比的測定結(jié)果34
• 2.4 討論與小結(jié)34-37
• 2.4.1 本章小結(jié)34-35
• 2.4.2 討論35-37
• 第三章 雙酚A單克隆抗體的制備37-55
• 3.1 材料與試劑37-39
• 3.1.1 動物和細(xì)胞37
• 3.1.2 主要試劑和材料37-38
• 3.1.3 溶液系統(tǒng)38-39
• 3.1.4 實驗儀器39
• 3.2 實驗方法39-46
• 3.2.1 動物免疫39-40
• 3.2.2 免疫血清效價檢測40
• 3.2.3 細(xì)胞融合40-41
• 3.2.4 雜交瘤的篩選及業(yè)克隆41-43
• 3.2.5 細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇43-44
• 3.2.6 腹水抗體的純化與鑒定44
• 3.2.7 抗體含量的測定44-45
• 3.2.8 抗體亞型的鑒定45
• 3.2.9 純化后抗體效價測定45
• 3.2.10 抗體靈敏度的檢測45-46
• 3.2.11 抗體特異性的鑒定46
• 3.3 結(jié)果與討論46-53
• 3.3.1 免疫血清效價測定46-47
• 3.3.2 雜交瘤細(xì)胞的觀察和篩選47-48
• 3.3.3 陽性細(xì)胞孔的亞克隆48
• 3.3.4 腹水純化結(jié)果48-49
• 3.3.5 抗體含量的確定49
• 3.3.6 抗體亞型的確定49-50
• 3.3.7 純化后腹水效價的確定50-51
• 3.3.8 BPA競爭性抑制曲線的繪制51-52
• 3.3.9 抗體特異性鑒定52-53
• 3.4 討論與小結(jié)53-55
• 3.4.1 本章小結(jié)53
• 3.4.2 討論53-55
• 第四章 膠體金層析試紙條的建立55-71
• 4.1 試劑與儀器55-56
• 4.1.1 試劑55-56
• 4.1.2 材料與儀器56
• 4.2 實驗方法56-60
• 4.2.1 膠體金的制備56
• 4.2.2 雙酚A抗體探針的制備56-58
• 4.2.3 雙酚A免疫層析試紙條的組裝58-59
• 4.2.4 試紙條性能的測定59-60
• 4.3 結(jié)果與分析60-68
• 4.3.1 膠體金質(zhì)量的鑒定60-62
• 4.3.2 膠體金標(biāo)記抗體62-65
• 4.3.3 膠體金試紙組裝65-66
• 4.3.4 試紙條性能的測試66-68
• 4.4 討論與小結(jié)68-71
• 4.4.1 本章小結(jié)68-69
• 4.4.2 討論69-71
• 參考文獻71-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文76-78
• 致謝78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林彤;獨軍政;叢國正;邵軍軍;高閃電;�；菔|;謝慶閣;;膠體金標(biāo)記免疫層析技術(shù)的最新應(yīng)用進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年16期

2 張慧嫦;張少恩;吳忠華;羅鵬;游雄;吳麗燕;;膠體金免疫層析法快速檢測鹽酸克倫特羅殘留[J];中國國境衛(wèi)生檢疫雜志;2008年01期

3 張付賢;王興龍;;免疫膠體金技術(shù)影響因素分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年05期

4 周玉;李巖松;潘風(fēng)光;譚建華;柳增善;王哲;;小鼠腹水IgG類單克隆抗體純化方法的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2006年10期

5 王蘭;余宇燕;王瓊娥;莊惠生;;雙酚A人工抗原的合成與表征[J];化學(xué)試劑;2005年12期

6 張平;鄧正棟;程婷婷;張磊;;水樣中雙酚A檢測技術(shù)研究[J];中國環(huán)境監(jiān)測;2008年06期

7 霍乃蕊;韓克光;;細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用[J];激光生物學(xué)報;2006年02期

8 彭劍淳,劉曉達(dá),丁曉萍,付占江,王全立;可見光光譜法評價膠體金粒徑及分布[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2000年03期

9 張彥麗;任佳麗;李忠海;吳新華;劉延麗;;食品包裝材料中雙酚A的研究進展[J];食品與機械;2011年01期

10 吳剛;姜瞻梅;霍貴成;田波;;膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用[J];食品工業(yè)科技;2007年12期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 張彩霞;雪卡毒素單克隆抗體的制備及鑒定[D];廣東工業(yè)大學(xué);2011年

2 馮梁;磺胺二甲嘧啶膠體金免疫層析試紙條的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 張明;磺胺甲VA唑膠體金免疫層析快速檢測試紙條的研制[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

4 倫麗麗;己烯雌酚單克隆抗體制備與確證及其免疫親和柱的試制[D];江蘇大學(xué);2009年

5 劉瑩;有機磷農(nóng)藥的膠體金免疫層析快速檢測試紙條的研制[D];上海師范大學(xué);2009年

6 王亞瓊;環(huán)境激素雙酚A分子印跡聚合物的制備及其在傳感器方面的應(yīng)用[D];西南大學(xué);2010年

7 盧守英;黃曲霉毒素B1膠體金免疫層析試紙條的研制[D];揚州大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：雙酚A單克隆抗體制備及膠體金免疫層析試紙條的研制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：389275