【目的】苯丙氨酸解氨酶(PAL)在苯丙烷代謝途徑中具有重要作用,Ptr PAL基因的挖掘、酶學(xué)性質(zhì)分析和應(yīng)用為毛果楊苯丙烷代謝途徑的研究和肉桂酸(t-ca)合成提供參考�！痉椒ā炕诨蚪M注釋信息,挖掘毛果楊Ptr PAL基因,進行原核表達和酶學(xué)性質(zhì)分析。以L-苯丙氨酸(L-Phe)為底物,通過全細胞催化合成t-ca�！窘Y(jié)果】通過挖掘毛果楊基因組得到了5個Ptr PAL基因,系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明其在進化上分為兩組。Ptr PAL3和PtrPAL4來自不同進化分支,選取其進行原核表達和酶學(xué)性質(zhì)分析。鎳柱純化后的重組蛋白re PtrPAL3和re PtrPAL4最適溫度分別是55℃和60℃,最適p H分別是8.5和8.0,比酶活分別為3.363和3. 381 U/mg,且均具有微弱的酪氨酸解氨酶活力。重組蛋白的動力學(xué)分析表明,re PtrPAL3對L-Phe的親和力更高。將re PtrPAL3應(yīng)用于L-Phe脫氨生產(chǎn)t-ca,全細胞催化7 h可產(chǎn)生104 mmol/L t-ca。【結(jié)論】具有不同轉(zhuǎn)錄特異性的兩種re PtrPAL酶學(xué)性質(zhì)接近,但re PtrPAL3表現(xiàn)出更高的催化效率,更適合...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 試驗方法
        1.2.1 毛果楊PAL基因搜索與序列分析
        1.2.2 重組rePtrPALs的原核克隆表達與純化
        1.2.3 重組rePtrPAL的酶學(xué)性質(zhì)測定
        1.2.4 全細胞催化反應(yīng)
        1.2.5 HPLC檢測反應(yīng)底物和產(chǎn)物
2 結(jié)果與分析
    2.1 毛果楊PAL基因特征
    2.2 重組rePtrPAL的表達純化與活力
    2.3 rePtrPAL3和rePtrPAL4酶學(xué)性質(zhì)
        2.3.1 溫度和p H對酶活的影響
        2.3.2 rePtrPALs的熱穩(wěn)定性
        2.3.3 rePtrPALs動力學(xué)參數(shù)
    2.4 重組大腸桿菌生物催化合成反式肉桂酸
3 討論



本文編號：3819206