漆酶(Laccase EC 1.10.3.2)是一類隸屬于銅藍(lán)氧化酶家族的多酚氧化酶,通常以分子氧為受體催化底物進(jìn)行單電子氧化,是一種高效的綠色催化劑。通過(guò)與一些小分子介體物質(zhì)構(gòu)成漆酶介體系統(tǒng)(LMS),可進(jìn)一步拓寬漆酶作用范圍。通過(guò)納米固定化技術(shù),可提高漆酶的穩(wěn)定性和重復(fù)性,在環(huán)境污染物及木質(zhì)素降解方面具有巨大的應(yīng)用潛力。裸腳菇屬(Gymnopus)真菌是小皮傘科的重要類群,在森林生態(tài)系統(tǒng)的碳素循環(huán)中扮演著重要的分解者作用,其種類繁多、系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系復(fù)雜,已有研究主要圍繞在系統(tǒng)分類方面,而木質(zhì)纖維素降解酶鮮有報(bào)道。本研究以采集并分離自云南楚雄的裸腳菇子實(shí)體為材料,開展分離鑒定、菌絲最適培養(yǎng)條件、胞外木質(zhì)素降解酶活性、Cu2+誘導(dǎo)產(chǎn)漆酶活性、胞外漆酶分離純化、漆酶介體系統(tǒng)、納米二氧化硅固定化漆酶制備,以及對(duì)染料脫色應(yīng)用等研究,具體內(nèi)容如下:1、采用形態(tài)學(xué)和轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)鑒定確定YAASM5159菌株為蠟質(zhì)裸腳菇(Gymnopus luxurians)。采用單因子實(shí)驗(yàn)確定該菌株菌絲最適培養(yǎng)條件包括:碳源為淀粉,氮源為酵母浸粉、胰蛋白胨、牛肉膏,C/N比范圍50-60/1,生長(zhǎng)因子VB...

【文章頁(yè)數(shù)】：122 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 漆酶研究進(jìn)展
        1.1.1 漆酶的分類與功能
        1.1.2 真菌漆酶的結(jié)構(gòu)與反應(yīng)機(jī)理
        1.1.3 漆酶理化性質(zhì)
        1.1.4 漆酶分離純化方法
        1.1.5 漆酶基因克隆
    1.2 漆酶應(yīng)用研究
        1.2.1 染料降解
        1.2.2 生物漂白
        1.2.3 生物脫毒
        1.2.4 食品加工
    1.3 漆酶介體系統(tǒng)
        1.3.1 漆酶介體系統(tǒng)的氧化機(jī)制
        1.3.2 介體類型
        1.3.3 漆酶介體系統(tǒng)作用機(jī)理
    1.4 漆酶固定化研究
        1.4.1 固定化材料
        1.4.2 固定化技術(shù)及分類
        1.4.3 固定化漆酶應(yīng)用
    1.5 蠟質(zhì)裸腳菇
    1.6 本研究的目的與意義
    1.7 技術(shù)路線圖
第二章 云南野生裸腳菇的分離鑒定、培養(yǎng)條件與木質(zhì)纖維素降解酶活性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株分離與保存
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株分離與培養(yǎng)
        2.2.2 形態(tài)與分子鑒定
        2.2.3 菌絲體最適培養(yǎng)條件
        2.2.4 液體發(fā)酵與樣品制備
        2.2.5 木質(zhì)纖維素降解酶活性
        2.2.6 Cu²⁺對(duì)液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶量的影響
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 形態(tài)與分子鑒定
        2.3.2 菌絲體最適培養(yǎng)條件
        2.3.3 木質(zhì)纖維素降解酶活性
        2.3.4 Cu²⁺對(duì)液體發(fā)酵產(chǎn)漆酶量的影響
    2.4 分析與討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 YAASM5159菌株漆酶分離純化及酶學(xué)特性
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 試劑
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 漆酶粗酶液的制備
        3.2.2 漆酶分離純化
        3.2.3 SDS-PAGE
        3.2.4 YAASM5159漆酶N-端測(cè)序
        3.2.5 YAASM5159漆酶肽段測(cè)序
        3.2.6 YAASM5159漆酶酶學(xué)性質(zhì)
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 漆酶分離純化結(jié)果
        3.3.2 漆酶肽段測(cè)序結(jié)果
        3.3.3 N-端序列測(cè)序結(jié)果
        3.3.4 YAASM5159漆酶酶學(xué)性質(zhì)
    3.4 分析與討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 漆酶介體系統(tǒng)對(duì)染料脫色應(yīng)用研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 漆酶
        4.1.2 介體
        4.1.3 染料
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 漆酶介體系統(tǒng)(LMS)的構(gòu)建
        4.2.2 最適溫度
        4.2.3 最適pH
        4.2.4 最適介體濃度
        4.2.5 最適條件下漆酶介體系統(tǒng)對(duì)染料的降解效果
        4.2.6 全波段掃描
        4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 漆酶介體系統(tǒng)(LMS)的構(gòu)建
        4.3.2 最適溫度
        4.3.3 最適pH
        4.3.4 最適介體濃度
        4.3.5 最適條件下染料脫色效果
        4.3.6 全波段掃描
    4.4 分析與討論
    4.5 本章小結(jié)
第五章 納米SiO₂固定化漆酶的制備、表征及染料脫色研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 漆酶
        5.1.2 商品化納米SiO₂粒子
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 SiO₂載體的制備
        5.2.2 漆酶固定化
        5.2.3 SiO₂載體及固定化酶的表征
        5.2.4 漆酶酶活及固定化效率測(cè)定
        5.2.5 SiO₂-H-GLL最適固定化反應(yīng)條件
        5.2.6 SiO₂-H-GLL酶學(xué)特性
        5.2.7 固定化漆酶的染料脫色能力研究
        5.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 漆酶固定化及其表征
        5.3.2 載體及固定化漆酶表征分析
        5.3.3 最適固定化反應(yīng)條件
        5.3.4 酶學(xué)特性
        5.3.5 固定化漆酶對(duì)染料的脫色能力研究
    5.4 分析與討論
    5.5 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與進(jìn)一步工作
    6.1 全文結(jié)論
    6.2 進(jìn)一步工作
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄1 基于內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)的YAASM5159菌株序列
附錄2 GLL漆酶N-末端測(cè)序譜圖
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3797763