近年來,小分子熒光探針由于其高靈敏度和高時空分辨率而備受關(guān)注,是生物檢測和成像的重要工具之一。其中,七甲川菁類作為典型的近紅外熒光染料,因其優(yōu)異的光物理性質(zhì)、良好的生物相容性和低毒性而廣泛應(yīng)用于小分子熒光探針的設(shè)計。在分子識別和特定有機反應(yīng)的幫助下,菁類染料的研究在過去的幾十年里蓬勃發(fā)展,其中功能性的菁染料對特定的分析物具有良好選擇性。本論文以七甲川花菁為熒光團,通過修飾不同的識別基團改變其共軛聚甲炔?-電子體系,設(shè)計了以下三種近紅外比率型熒光探針:(1)在Cy-O的氧原子上引入一個磷酸基團得到具有線粒體特異性的近紅外比率型熒光探針Cy-OP,用于高靈敏度和選擇性識別堿性磷酸酶(ALP)。經(jīng)過ALP處理后,探針Cy-OP表現(xiàn)出優(yōu)異的識別性能,如選擇性高、靈敏度好(檢測限低至0.16 mU/mL)、響應(yīng)時間短(30分鐘內(nèi))和低熒光背景下大的發(fā)射峰位移。此外,酶殘留物的發(fā)射比(I_{616 nm}/I_{766 nm})有利于其在復雜生物系統(tǒng)中的應(yīng)用。因此,探針Cy-OP成功應(yīng)用于活細胞中ALP的檢測和熒光定位。(2)設(shè)計合成了一例基于七甲川花菁的近紅外比率...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 熒光探針
        1.1.1 近紅外熒光探針
        1.1.2 比率型熒光探針
    1.2 菁染料概述
        1.2.1 七甲川菁類熒光探針
        1.2.2 七甲川菁類熒光探針的研究進展
    1.3 生物酶及其檢測意義
        1.3.1 生物酶熒光探針的研究進展
        1.3.2 堿性磷酸酶(ALP)的檢測意義及其研究進展
        1.3.3 酪氨酸酶(TYR)的檢測意義及其研究進展
        1.3.4 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT/ γ-GT)的檢測意義及其研究進展
    1.4 本論文的選題依據(jù)及研究思路
第二章 線粒體特異性的近紅外熒光探針用于ALP活性的比率檢測
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 實驗方法
        2.2.4 紫外-可見吸收光譜、熒光光譜的測定
        2.2.5 檢測限的測定
        2.2.6 探針Cy-OP與 ALP反應(yīng)的動力學研究
        2.2.7 細胞培養(yǎng)和熒光成像方法
        2.2.8 細胞毒性研究
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 探針Cy-OP的設(shè)計合成及其對ALP的光譜響應(yīng)
        2.3.2 探針Cy-OP對 ALP檢測機理的討論
        2.3.3 探針Cy-OP對 ALP檢測的條件優(yōu)化
        2.3.4 探針Cy-OP對 ALP的檢測性能研究
        2.3.5 ALP酶催化激活機制
        2.3.6 探針Cy-OP對 ALP檢測的選擇性實驗
        2.3.7 探針Cy-OP對活細胞中ALP的熒光成像
    2.4 小結(jié)
第三章 用比色法和近紅外比率型熒光探針測定內(nèi)源性酪氨酸酶活性
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 實驗試劑
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 實驗方法
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 探針Cy-tyr的設(shè)計合成及其對TYR的光譜響應(yīng)
        3.3.2 探針Cy-tyr對 TYR檢測機理的討論
        3.3.3 探針Cy-tyr對 TYR檢測的條件優(yōu)化
        3.3.4 探針Cy-tyr對 TYR的檢測性能研究
        3.3.5 探針Cy-tyr對 TYR檢測的選擇性實驗
        3.3.6 探針Cy-tyr對活細胞中TYR的熒光成像
    3.4 小結(jié)
第四章 γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的近紅外比率型熒光探針的設(shè)計與成像
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 實驗試劑
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 實驗方法
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 探針Cy-GGT的設(shè)計合成及其對GGT的光譜響應(yīng)
        4.3.2 探針Cy-GGT對 GGT檢測機理的討論
        4.3.3 探針Cy-GGT對 GGT檢測的條件優(yōu)化
        4.3.4 探針Cy-GGT對 GGT的檢測性能研究
        4.3.5 探針Cy-GGT對 GGT檢測的選擇性實驗
        4.3.6 探針Cy-GGT對活細胞中GGT的熒光成像
        4.3.7 探針Cy-GGT對動物體內(nèi)GGT活性檢測實驗
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文目錄



本文編號：3764909