發(fā)布時間：2023-03-04 19:51

　　α-突觸核蛋白(α-Synuclein)是一種由140個氨基酸殘基組成的天然無結(jié)構(gòu)蛋白,其聚集物是帕金森綜合征病理標(biāo)志物——路易小體的主要成分。因此,α-突觸核蛋白被認(rèn)為與帕金森綜合癥的發(fā)病機制密切相關(guān),引起廣泛關(guān)注并成為研究熱點。線粒體是一種由兩層膜結(jié)構(gòu)包被的真核細(xì)胞器,它是細(xì)胞呼吸作用通過氧化磷酸化合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所,能提供細(xì)胞生理活動所需的能量,也被稱為細(xì)胞的“Power House”。同時,線粒體還參與了其他諸多細(xì)胞進(jìn)程,如細(xì)胞間的信息傳遞、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡。線粒體功能異常則與多種疾病相關(guān),如癌癥、衰老、炎癥、神經(jīng)退行性疾病等,其中就包括帕金森綜合癥。據(jù)統(tǒng)計全球約有500萬帕金森病患者,大量科學(xué)家致力于研究該疾病的發(fā)病機理并研發(fā)有效的治療方法,而研究α-突觸核蛋白與線粒體膜的相互作用,以及在線粒體中開展α-突觸核蛋白的原位研究是了解該疾病發(fā)病機制的重要途徑,對于疾病的認(rèn)識與治療具有重要意義。另外,隨著蛋白質(zhì)科學(xué)研究的發(fā)展與深入,科學(xué)家們越來越關(guān)注蛋白質(zhì)在其發(fā)揮功能的細(xì)胞乃至亞細(xì)胞中的表現(xiàn)與功能,在線粒體中展開蛋白質(zhì)的原位研究也可以為未來蛋白質(zhì)研究提供一種新方法...

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 突觸核蛋白α-Synuclein簡介
        1.1.1 蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)
        1.1.2 天然無結(jié)構(gòu)蛋白的存在
        1.1.3 α-Synuclein為天然無結(jié)構(gòu)蛋白
        1.1.4 α-Synuclein與帕金森綜合征
        1.1.5 α-Synuclein與線粒體功能異常
    1.2 線粒體簡介
        1.2.1 線粒體結(jié)構(gòu)
        1.2.2 線粒體功能
        1.2.3 線粒體功能異常與疾病
        1.2.4 線粒體功能異常與帕金森綜合征
    1.3 生物大分子核磁共振
        1.3.1 核磁共振基本原理
        1.3.2 化學(xué)位移的介紹
        1.3.3 蛋白質(zhì)核磁共振
        1.3.4 二維核磁共振
        1.3.5 細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)核磁共振
    1.4 研究內(nèi)容及意義
第2章 大鼠肝臟線粒體的提取
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 線粒體的提取
        2.2.3 線粒體純度檢測
        2.2.4 線粒體完整性檢測
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 線粒體純度檢測結(jié)果
        2.3.2 線粒體完整性檢測結(jié)果
    2.4 小結(jié)
第3章 利用電穿孔方法將α-Synuclein導(dǎo)入線粒體
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 α-Synuclein的表達(dá)純化及檢測
        3.2.3 α-Synuclein電轉(zhuǎn)線粒體實驗
        3.2.4 電轉(zhuǎn)效果的核磁檢測
        3.2.5 線粒體內(nèi)源性α-Synuclein的檢測
        3.2.6 電穿孔對線粒體影響的檢測
        3.2.7 α-Synuclein的主鏈氨基酸歸屬
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 α-Synuclein的純化結(jié)果分析
        3.3.2 α-Synuclein的主鏈歸屬
        3.3.3 線粒體背景信號的核磁檢測結(jié)果
        3.3.4 電穿孔對線粒體影響的檢測結(jié)果
        3.3.5 電轉(zhuǎn)實驗的核磁檢測
    3.4 小結(jié)
第4章 多種標(biāo)記方法在該研究中的應(yīng)用
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 ¹⁹F標(biāo)記α-Synuclein電轉(zhuǎn)線粒體實驗
        4.2.3 ¹³C-¹⁵N標(biāo)記α-Synuclein電轉(zhuǎn)線粒體實驗
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 α-Synuclein在線粒體內(nèi)的¹⁹F譜圖
        4.3.2 α-Synuclein在線粒體內(nèi)的C-H相關(guān)譜圖
        4.3.3 α-Synuclein在線粒體內(nèi)的C-N相關(guān)譜圖
    4.4 小結(jié)
第5章 α-Synuclein與線粒體相科學(xué)關(guān)問題探究
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 α-Synuclein與完整線粒體相互作用的檢測
        5.2.3 線粒體內(nèi)α-Synuclein的譜圖分析
        5.2.4 α-Synuclein與線粒體裂解液孵育后回收檢測
        5.2.5 α-Synuclein Y39E突變體的電轉(zhuǎn)與分析
        5.2.6 稀溶液中α-Synuclein與Cu²⁺離子相互作用的檢測
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 α-Synuclein與完整線粒體相互作用的檢測結(jié)果
        5.3.2 線粒體內(nèi)α-Synuclein的譜圖分析結(jié)果
        5.3.3 α-Synuclein與線粒體裂解液孵育后回收檢測結(jié)果
        5.3.4 α-Synuclein Y39E突變體的電轉(zhuǎn)與分析結(jié)果
        5.3.5 α-Synuclein與Cu²⁺離子相互作用的檢測結(jié)果
    5.4 小結(jié)
第6章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號：3754897