共振光技術(shù)是近二十年來快速發(fā)展的一種光學(xué)檢測方法,因其具有快速,靈敏的特點,被廣泛用于小分子、蛋白質(zhì)及病毒的檢測。將適配體結(jié)合到共振光技術(shù)中,將賦予這種檢測方法更好的特異性和選擇性。為了實現(xiàn)這種高效靈敏的檢測方法,本文構(gòu)建了兩條以適配體為基礎(chǔ)的dsDNA并將其作為結(jié)合元件,進(jìn)行了三個共振光的實驗,完成了對多種生物標(biāo)志物的檢測,內(nèi)容為:（1）適配體的dsDNA在共振光傳感器中同時檢測癌癥標(biāo)志物癌胚抗原125和應(yīng)激誘導(dǎo)的磷蛋白1。用羧基熒光素標(biāo)記的癌胚抗原125適配體和青色素5標(biāo)記的應(yīng)激誘導(dǎo)的磷蛋白1適配體與氧化石墨烯的熒光傳感器說明了癌胚抗原125和應(yīng)激誘導(dǎo)的磷蛋白1的適配體能特異性結(jié)合癌胚抗原125和應(yīng)激誘導(dǎo)的磷蛋白1。以這兩條適配體與它們的互補鏈組裝了dsDNA,用甲基紫作用這個dsDNA得到了共振光傳感器,該共振光信號在兩個波長處的強度變化可以同時準(zhǔn)確定量混合溶液中的癌胚抗原125和應(yīng)激誘導(dǎo)的磷蛋白1的量。（2）適配體的dsDNA在共振光傳感器中同時檢測溶菌酶和ATP。以ATP的適配體序列和溶菌酶適配體的互補序列為DNA1,以溶菌酶的適配體序列和ATP適配體的互補序列為DNA2,將... 

【文章來源】：湘潭大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

適配體與蛋白質(zhì)特定區(qū)域結(jié)合的三維圖

.3 適配體在 RLS 傳感器中的應(yīng)用意義及其研究現(xiàn)狀為了解決 RLS 技術(shù)對目標(biāo)物檢測的選擇性難題，適配體被研究員用到檢測中，這得益于適配體對目標(biāo)分析物的高選擇性和高親和性。因此提出了基于適配體的共振光傳感器。這種傳感器繼承了 RLS 的高靈敏體的高選擇性，被廣泛應(yīng)用于目標(biāo)分析物的檢測，而且在檢測目標(biāo)分很好的選擇性和很低的檢出限。2011 年廣西師范大學(xué)的蔣志亮等人[23]將 ATP 適配體與其互補鏈進(jìn)行，得到雙鏈 DNA，將分析物 ATP 加入之后，ATP 與其適配體特異性結(jié)雙鏈 DNA，這時候互補鏈就是成為游離狀態(tài)的單鏈 DNA，如圖 1.2。顆粒加入體系中，在不存在分析物 ATP 時，也就不存在游離狀態(tài)的A，這個時候的金納米顆粒發(fā)生聚集形成強的 RLS 信號，而隨著分析物入，游離出來的單鏈 DNA 可以保護(hù)部分金納米顆粒而減少金納米顆粒，從而減少體系的 RLS 強度，這就實現(xiàn)了 ATP 的定量檢測。這個方 的檢測具有高的靈敏性和選擇性。

圖 1.3 適配體的共振光傳感器對前列腺癌胚抗原的檢測原理圖2012 年汕頭大學(xué)的陳展光等人[25]將巰基修飾的單鏈適配體固定到金納，利用目標(biāo)物前列腺抗原 PSA 與適配體的特異性結(jié)合來引起金納米顆，這種聚集會產(chǎn)生強的 RLS 信號，通過這種 RLS 信號的變化就可以成SA 的濃度（圖 1.3）。該方法對 PSA 的檢測限為 0.032 ng/mL,這種高的益于 RLS 光譜試驗的高度靈敏性。2014 科學(xué)家將合成的雙核鈾酰復(fù)合物和 ATP 適配體修飾的金納米顆粒 探針[26]，由雙核鈾酰復(fù)合物與 ATP 形成一個線性超分子，同時適配體納米顆粒由于適配體與目標(biāo)物的特異性結(jié)合，這樣 ATP 就可以作為一梁物質(zhì)，將這三者結(jié)合成一個大尺寸的顆粒，得到強的 RLS 信號，這強度變化與 ATP 的濃度成一個線性關(guān)系，其線性范圍可以從 5 到 50


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