玉米蛋白是一類開發(fā)價(jià)值較高的蛋白質(zhì)資源。然而,玉米蛋白存在水溶解度低、自身結(jié)構(gòu)致密、富含疏水性氨基酸等問題,導(dǎo)致蛋白生物利用度降低,限制了玉米蛋白的應(yīng)用。針對(duì)以上問題,可通過物理、化學(xué)和生物方法進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)修飾改性,提高其生物利用度。本文研究了玉米蛋白的酶解法修飾改性,通過對(duì)玉米蛋白的超聲波預(yù)處理改善酶解反應(yīng);為了實(shí)現(xiàn)對(duì)酶解反應(yīng)過程的精準(zhǔn)控制,研究了酶解過程的近紅外原位實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)技術(shù)。主要研究結(jié)論如下:（1）研究了玉米蛋白水解度與生物利用度之間的關(guān)系。通過SD大鼠生長(zhǎng)代謝試驗(yàn)及SD大鼠在體單向小腸灌流模型探究了不同水解度玉米蛋白對(duì)體內(nèi)蛋白生物利用度的影響。結(jié)果表明,玉米蛋白水解度的變化直接影響生物利用度的大小。隨著水解度的增加,酶解液分子量小于200 Da組分含量增加,分子量為200⁵00 Da組分的含量變化不顯著。氨基酸組成分析表明,游離親水性氨基酸中Asp、Ser、Glu的含量增加,總氨基酸、疏水性氨基酸含量先增加后減少,在水解度為15%時(shí)達(dá)到最大值。氨基酸消化率研究結(jié)果表明,疏水性氨基酸Pro、Thr、Ala的消化率下降,Trp、Met的消化率上升,水解度對(duì)親... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：144 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

研究技術(shù)路線圖

超聲預(yù)處理酶解制備高生物利用度玉米蛋白及其過程近紅外光譜原位實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)28按照編輯的樣品序列進(jìn)行擺放，進(jìn)行氨基酸全自動(dòng)測(cè)定。稱取50mg蛋白樣品，用1mL超純水溶解，加入4mL30g/L的5-磺基水楊酸，在30℃靜置4h沉淀樣品液中的多肽和蛋白，游離氨基酸其余操作步驟采用常規(guī)氨基酸分析操作步驟。2.3.9SD大鼠在體單向小腸灌流實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)前取36只SD雄性大鼠（體重230±30g），禁食16h，自由飲水。根據(jù)6種不同水解度的玉米蛋白粉胃部模擬消化液和腸道模擬消化液將36只SD雄性大鼠隨機(jī)分成3組，每組內(nèi)大鼠體重相差不超過于10g。SD大鼠在體小腸灌流試驗(yàn)?zāi)Ｐ腿鐖D2.1所示。圖2.1SD大鼠在體單向小腸灌流模型Fig.2.1SDratinvivosmallintestineperfusionexperimentalmodel注：1.恒溫水浴鍋2.樣品處理液3.恒速蠕動(dòng)泵4.管路5.SD大鼠6.大鼠小腸7.收集液SD大鼠腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉和固定，打開腹腔。手動(dòng)分離待測(cè)腸段（十二指腸，空腸，回腸），在待測(cè)腸管兩端各切一個(gè)小口。上端小口與蠕動(dòng)泵的出口硅膠管（內(nèi)徑2.4mm，壁厚0.8mm）相連，用線扎緊，下端小口處插入硅膠管（內(nèi)徑2.4mm，壁厚0.8mm），用線扎緊。打開蠕動(dòng)泵，用預(yù)熱至37℃的生理鹽水沖洗腸管，排凈腸管內(nèi)容物，再用空氣排凈殘留液體后關(guān)閉。換為供試液（預(yù)先恒溫至37℃），開啟蠕動(dòng)泵，以2mL/min的流速灌流10min，將流速調(diào)至0.2mL/min，預(yù)平衡30min。開始大鼠在體小腸灌流試驗(yàn)，

江蘇大學(xué)博士學(xué)位論文29在0、30、60、90、120和150min時(shí)間節(jié)點(diǎn)段收集灌流液樣品。取樣品0.5mL測(cè)定酚紅濃度，其余樣品根據(jù)要求測(cè)定濃度。灌流結(jié)束后，剪取各個(gè)被灌流的腸段，測(cè)量腸內(nèi)徑以及長(zhǎng)度。2.3.10灌流液中酚紅濃度測(cè)定灌流液中酚紅濃度測(cè)定參照張燕等[13,2]方法，略作修改。取SD大鼠在體單向小腸灌腸液不同時(shí)間點(diǎn)的樣品（如有沉淀，可將灌腸液液進(jìn)行12000g離心5min），吸取上清液0.5mL，加入1mol/L氫氧化鈉溶液1mL，K-R液3.5mL，振蕩混勻，于558nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度測(cè)定吸光度。配制含有酚紅10、20、30、40、50μg/mL的K-R液標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1mol/LNaOH溶液為參比溶液，分別吸取0.5mL，按照上述方法進(jìn)行操作，測(cè)定吸光度。以不同濃度酚紅質(zhì)量濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖2.2）：A=0.0102x+0.0457，R2=0.9996，表明相關(guān)性良好，在1-50μg/mL線形關(guān)系良好。測(cè)定質(zhì)量濃度為10、20和40μg/mL酚紅的實(shí)際回收率，平均回收率為100.9±1.32%。圖2.2酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2.2StandardcureofPhenolredconcentration2.3.11灌流液中蛋白濃度的測(cè)定進(jìn)口和出口處灌流液中蛋白濃度采用2.3.2可溶性蛋白含量測(cè)定方法。為了消除灌流液體積變化的影響，出口處的灌流液中蛋白濃度采用酚紅法進(jìn)行校正。校正公式如下：()outincorrectedoutCPRCoutPR（2.8）樣品灌流液的蛋白吸收率Ap采用公式2.10進(jìn)行計(jì)算：in(out(corrected)0)pinCCCAC（2.9）

【參考文獻(xiàn)】：
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