熒光探針具有響應(yīng)快速、靈敏高效、檢測限低、成本經(jīng)濟等優(yōu)勢,被廣泛應(yīng)用于基因測序、早期疾病診斷、生物分析、食品檢測等領(lǐng)域�；谥c介導(dǎo)的鏈置換技術(shù)所構(gòu)建的熒光生物傳感器,不僅具備上述優(yōu)勢,還提高了熒光探針的可編程性,有效的增強了對復(fù)雜目標的識別能力。同時,它能與核酸適配體、DNA邏輯電路和酶催化等技術(shù)良好結(jié)合,拓寬了多種生物分析物的檢測識別范圍。目前該機制在支點激活和調(diào)控方面還存在短板,其支點區(qū)域具有堿基序列依賴性,且支點穩(wěn)定性不高,設(shè)計步驟繁瑣,不利于應(yīng)用范圍廣的熒光生物傳感器的構(gòu)建。針對目前問題,本論文設(shè)計了一種基于交叉支點介導(dǎo)DNA鏈置換的熒光探針,并應(yīng)用在單堿基錯配識別和目標寡核苷酸的識別。通過交叉支點等多種方案激活后續(xù)鏈置換反應(yīng),實時熒光監(jiān)測和聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗表明了該方案的可行性。具體研究工作如下:（1）交叉支點的構(gòu)建及DNA鏈置換反應(yīng)的研究:我們構(gòu)建了一種新型交叉支點介導(dǎo)鏈置換機理,該交叉支點是由兩組DNA序列完全獨立的寡核苷酸鏈R和T組成,激活下一步DNA鏈置換反應(yīng)并調(diào)控鏈置換反應(yīng)速率。對多條寡核苷酸的單堿基錯配試驗和支點長度影響鏈置換速率實驗,優(yōu)化了該體系的識別能力... 

【文章來源】：湘潭大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PNA雜交原理圖MALDI-TOFMS實驗SherryXiChen等[10]提出了一種條件性DNA熒光探針，能有效地區(qū)分雙鏈DNA(dsDNA)中多種單堿基錯配，且實現(xiàn)了DNA長片段中單個堿基的有效識別

圖1.2雙鏈支點交換機制的示意圖

基于GO的DNA熒光傳感分析示意圖


本文編號：3409540