本文關鍵詞：基于核酸適配體熒光法檢測赭曲霉素A，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一章：簡單介紹了核酸適配體的定義和特點,赭曲霉素A(OTA)檢測的重要性和常用的檢測方法；綜述了基于核酸適配體檢測赭曲霉素A的不同方法；闡述了本論文的立題背景、研究內容及創(chuàng)新點。 第二章：利用核酸適配體熒光探針,基于熒光共振能量轉移原理建立了一種檢測赭曲霉素A的熒光分析方法。赭曲霉素A在375nm波長下激發(fā),在430nm處可以發(fā)熒光,赭曲霉素A與標記有熒光素的核酸適配體結合后,兩者之間可發(fā)生熒光共振能量轉移,熒光素在518nm處的熒光強度增強。根據518nm處熒光強度的變化可實現對赭曲霉素A的檢測。這種檢測方法簡單、快速、特異性強,檢出限達到了1nmol/L。 第三章：利用熒光素標記的核酸適配體(FDNA)和熒光猝滅基團(BHQ)標記的互補寡聚核苷酸鏈(QDNA)建立了一種檢測赭曲霉素A的熒光分析法。未加入赭曲霉素A時,標記有熒光素的核酸適配體與標記有猝滅基團的互補寡聚核苷酸鏈結合,熒光基團與猝滅基團靠近,導致熒光猝滅；當加入赭曲霉素A后,FDNA與赭曲霉素A高親和力高特異性結合,熒光基團與猝滅基團遠離,FDNA的熒光信號得到恢復。根據FDNA與目標物結合前后熒光強度的變化,可以實現對赭曲霉素A的定量檢測。 第四章：利用赭曲霉素A本身的熒光特性,發(fā)展了一種通過熒光各向異性分析快速考察赭曲霉素A(OTA)與核酸適配體之間的相互作用的方法。赭曲霉素A與核酸適配體的特異性結合使分子體積增大,赭曲霉素A旋轉變慢,引起熒光各向異性值增大。通過熒光各向異性分析考察了緩沖液成分中金屬離子對適配體親和力的影響,結果發(fā)現當Na+與Ca2+同時存在時赭曲霉素A與核酸適配體之間的親和力明顯增強,這與溶液中只有Ca2+時相比親和力增大了18倍,當Ca2+不存在時適配體親和力完全消失。另外,利用熒光各向異性方法研究了核酸適配體突變對親和力的影響,對適配體親和力起重要作用的堿基可以被鑒別出。建立了一種基于適配體檢測OTA的熒光各向異性分析法,在緩沖液中固定適配體和OTA標準物的濃度,加入不同濃度的OTA待測物,OTA熒光各向異性值會隨著待測物濃度的增加而降低,根據熒光各向異性值的變化可以實現對OTA的檢測。 第五章：建立了一種采用單熒光基團標記的核酸適配體檢測赭曲霉素A的方法。當標記有熒光基團的適配體與OTA結合時,熒光基團周圍的環(huán)境發(fā)生變化,從而引起熒光強度的變化,根據熒光強度的變化實現對OTA的檢測�？疾炝诉m配體不同位點上標記熒光素(包括T堿基,3’端,5’端)對適配體親和力的影響,還考察了熒光素標記的適配體對OTA的響應性能。一些熒光素標記的核酸適配體在檢測OTA時表現出信號增加或是降低的響應。采用熒光開關適配體,實現了對OTA的快速、有選擇性的檢測,在稀釋后的紅葡萄酒中也可以檢測OTA,表明本方法可以實現復雜基質中OTA的檢測。
【關鍵詞】：核酸適配體 赭曲霉素A 熒光分析 熒光各向異性
【學位授予單位】：山西大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：O657.3
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 第一章 緒論14-34
• 1.1 引言14-15
• 1.2 赭曲霉素A檢測方法研究進展15-25
• 1.2.1 核酸適配體介紹15-16
• 1.2.2 基于核酸適配體的赭曲霉素A的檢測16-25
• 1.2.2.1 基于核酸適配體光學方法檢測赭曲霉素A16-19
• 1.2.2.2 基于核酸適配體電化學方法檢測赭曲霉素A19-24
• 1.2.2.3 基于核酸適配體檢測赭曲霉素A的其他方法24-25
• 1.3 立題背景及主要研究內容25-26
• 1.4 創(chuàng)新點26-27
• 參考文獻27-34
• 第二章 基于熒光共振能量轉移的核酸適配體探針檢測赭曲霉素A34-46
• 2.1 引言34-35
• 2.2 實驗部分35-36
• 2.2.1 儀器與試劑35
• 2.2.2 熒光分析35
• 2.2.3 實驗條件的優(yōu)化35-36
• 2.2.4 赭曲霉素A的檢測36
• 2.2.5 特異性實驗36
• 2.2.6 回收率實驗36
• 2.3 結果與討論36-42
• 2.3.1 實驗原理36-37
• 2.3.2 赭曲霉素A與FAM標記的適配體之間的FRET考察37
• 2.3.3 離子濃度的影響37-39
• 2.3.4 方法選擇性的考察39-40
• 2.3.5 赭曲霉素A的檢測40-41
• 2.3.6 紅葡萄酒樣品中赭曲霉素A的檢測41-42
• 2.4 結論42
• 參考文獻42-46
• 第三章 基于結構轉換適配體熒光法檢測赭曲霉素A46-58
• 3.1 引言46-47
• 3.2 實驗部分47-48
• 3.2.1 儀器和試劑47
• 3.2.2 熒光分析47
• 3.2.3 實驗條件的優(yōu)化47-48
• 3.2.4 赭曲霉素A的檢測48
• 3.2.5 特異性實驗48
• 3.2.6 回收率實驗48
• 3.3 結果與討論48-55
• 3.3.1 實驗原理48-49
• 3.3.2 離子濃度、pH值、Tween20的影響49-51
• 3.3.3 試劑加入順序及溫育溫度的影響51-52
• 3.3.4 選擇性的考察52-53
• 3.3.5 赭曲霉素A的檢測53-54
• 3.3.6 復雜基質中赭曲霉素A的檢測54-55
• 3.4 結論55
• 參考文獻55-58
• 第四章 利用熒光各向異性分析研究赭曲霉素A與適配體之間的相互作用及對赭曲霉素A的檢測58-80
• 4.1 引言58-59
• 4.2 實驗部分59-60
• 4.2.1 儀器和試劑59
• 4.2.2 實驗方法59-60
• 4.2.3 解離常數的測定60
• 4.3 結果與討論60-75
• 4.3.1 赭曲霉素A與適配體之間相互作用的熒光各向異性分析60-62
• 4.3.2 陽離子對適配體親和力的影響62-64
• 4.3.3 緩沖液pH對適配體親和力的影響64-65
• 4.3.4 解離常數的測定65-69
• 4.3.4.1 親和力的測定65
• 4.3.4.2 解離常數的測定65-66
• 4.3.4.3 不同緩沖液中解離常數的考察66-69
• 4.3.5 適配體堿基突變對親和力的影響69-72
• 4.3.6 采用熒光各向異性法檢測赭曲霉素A72-75
• 4.3.6.1 熒光各向異性法檢測赭曲霉素A72-73
• 4.3.6.2 復雜基質中赭曲霉素A的檢測73-75
• 4.4 結論75-76
• 參考文獻76-80
• 第五章 利用單熒光基團標記的核酸適配體檢測赭曲霉素A80-94
• 5.1 引言80
• 5.2 實驗部分80-82
• 5.2.1 儀器和試劑80-81
• 5.2.2 熒光分析81-82
• 5.3 結果與討論82-89
• 5.3.1 實驗原理82
• 5.3.2 適配體標記位點的篩選82-84
• 5.3.3 適配體對赭曲霉素A的熒光響應84-88
• 5.3.4 檢測方法的選擇性考察88
• 5.3.5 復雜基質中赭曲霉素A的檢測88-89
• 5.4 結論89
• 參考文獻89-94
• 攻讀學位期間取得的研究成果94-95
• 致謝95-96
• 個人簡況及聯系方式96-98

【參考文獻】

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1 朱廣華,鄭洪,鞠q，

本文編號：323516