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核酸適配體應(yīng)用于環(huán)丙氨嗪快速檢測新方法研究

發(fā)布時間:2021-03-27 00:04
  環(huán)丙氨嗪是一種三嗪類化合物,作為飼料添加劑被廣泛應(yīng)用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)。它在環(huán)境中具有遷移性,可以進入人體內(nèi),對人體健康產(chǎn)生影響。環(huán)丙氨嗪在動物和植物體內(nèi)可通過脫烷基作用代謝為三聚氰胺,長期攝入三聚氰胺會導致腎結(jié)石和腎衰竭。2008年毒奶粉事件后三聚氰胺被廣泛關(guān)注,然而大眾忽略了對三聚氰胺的代謝原藥環(huán)丙氨嗪的關(guān)注。隨著政府后續(xù)對奶制品檢測范圍的擴大,環(huán)丙氨嗪才逐漸進入了人們的視線。如今,在牛奶出廠前都要按照國家標準嚴格的檢測牛奶中環(huán)丙氨嗪和三聚氰胺的殘留量,而出廠前牛奶數(shù)量眾多,因此如何在出廠前快速檢測牛奶中的環(huán)丙氨嗪已成為熱門話題。傳統(tǒng)的環(huán)丙氨嗪檢測方法包括高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法等,由于其步驟繁瑣、檢測費用高等原因不適用于現(xiàn)場快速檢測。因此研究建立高效、快速、經(jīng)濟的檢測方法檢測環(huán)丙氨嗪具有重要的理論價值和實用意義。核酸適配體制備方法十分簡易,不易降解,并且標記方法多種多樣,因而本研究以核酸適配體為基礎(chǔ),選擇不同的信號輸出技術(shù)開發(fā)出了三種快速檢測牛奶中環(huán)丙氨嗪的方法;诃h(huán)丙氨嗪特異性核酸適配體和熒光淬滅開發(fā)出了一種快速檢測牛奶中環(huán)丙氨嗪的方法。當用FAM標記的富含G的特異性核酸適配... 

【文章來源】:上海應(yīng)用技術(shù)大學上海市

【文章頁數(shù)】:70 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

核酸適配體應(yīng)用于環(huán)丙氨嗪快速檢測新方法研究


環(huán)丙氨嗪結(jié)構(gòu)式Fig1.1StructuralformulaofCyromazine

示意圖,技術(shù),示意圖,靶標


機單鏈序列文庫,然后將靶標加入到該隨機序列文庫中,使靶標與隨機序列文庫中的序列通過氫鍵、范德華力和空間構(gòu)象等進行相互作用,結(jié)合成較為穩(wěn)定的核苷酸-靶標復合物;在第1輪篩選后,洗脫掉未與靶標結(jié)合的隨機序列,留下能與靶標穩(wěn)定結(jié)合的核酸序列,并以此核酸分子為模板進行PCR擴增,進行下一輪的篩選過程[85]。依照此篩選流程進行反復篩選擴增,直到得到能與靶標進行特異性結(jié)合的適配體序列。將最后得到的適配體序列進行PCR擴增并送到生物公司進行純化和克隆測序,然后對該適配體進行解離常數(shù)測定和和特異性檢驗。圖1.2SELEX篩選技術(shù)示意圖[86]Fig1.2DiagramfortheSELEXenrichment1.3.2適配體在檢測中的應(yīng)用由于核酸適配體具有具有高特異性、高親和力、制備簡單、合成成本低等優(yōu)點,其

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