氨基酸是一種重要的小分子手性代謝物,其含量變化通常與生命體的生理活動與疾病有著密切關(guān)系。近年來的一些研究表明,某些D構(gòu)型氨基酸的含量在生命體處于疾病狀態(tài)下時均表現(xiàn)出顯著的變化。由于其在體內(nèi)含量處于痕量水平,因此在復(fù)雜生物樣本中對D構(gòu)型氨基酸進行準(zhǔn)確的定量分析頗具有挑戰(zhàn)性。本論文基于課題組前期的研究基礎(chǔ),設(shè)計了一個帶有溴同位素的手性醛探針D-BPBr,并結(jié)合高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)開展了一系列針對手性氨基酸和伯胺類化合物的分析研究。具體內(nèi)容包括以下三個部分:1.制備了新型手性醛探針D-BPBr,該探針可對14對手性氨基酸進行標(biāo)記,并基于高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)在C18色譜柱上對衍生產(chǎn)物實現(xiàn)良好的分離分析,且該色譜分離度（Rs）可達1.14至8.83。同時,探針D-BPBr具有良好的手性識別能力,可以在相同條件下可令D構(gòu)型氨基酸具有更強的質(zhì)譜響應(yīng),且其對于D構(gòu)型氨基酸的手性識別值（Cs）達1.31至12.87。該方法可對23個氨基酸進行定量分析,并成功實現(xiàn)復(fù)雜生物基質(zhì)尿液和血漿中對手性氨基酸的檢出和定量。2.采用探針D-BPBr對55例健康人和52例胃癌病人的尿液樣品中手性氨基酸進行靶向分析。... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Wang設(shè)計的一對手性醛探針的結(jié)構(gòu)[35]

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文2一種手性醛探針對蛋白氨基酸的定量分析22時間的色譜峰，分別對應(yīng)79Br和81Br標(biāo)記的衍生產(chǎn)物，同時沒有觀察到明顯的干擾峰，表明該Br-同位素探針標(biāo)記方法不僅簡化了探針的數(shù)量，而且在區(qū)分手性氨基酸方面具有良好的特異性。同時，兩個離子通道中的色譜峰由于其強度幾乎相同，都可以用于定量分析，且另外一個通道可以用于定性判斷以排除假陽性信號�？偨Y(jié)而言，使用新設(shè)計的探針D-BPBr，可以更好地鑒定和定量復(fù)雜手性氨基酸，產(chǎn)物中溴同位素的一個離子對通道用于定量分析，且可以用另一個通道排除假陽性信號。圖2.4探針D-BPBr標(biāo)記的Trp在負(fù)離子模式下79Br通道(586->218)和81Br通道(588->218)MRM圖。第一個峰是L-Trp衍生產(chǎn)物，第二個峰是D-Trp衍生產(chǎn)物。2.3.2反應(yīng)效率反應(yīng)效率以檢測加入探針反應(yīng)后氨基酸剩余量與相同條件下未加入探針(乙腈補足探針溶液體積)氨基酸量計算得，計算公式2-1如下：反應(yīng)效率=1-反應(yīng)后氨基酸剩余量/未反應(yīng)時氨基酸總量(2-1)衍生效率計算結(jié)果如表2.2所示，對于同一氨基酸，探針D-BPBr對其D構(gòu)型氨基酸衍生效率高于其L構(gòu)型氨基酸。其中，L構(gòu)型氨基酸的衍生效率為0.69-0.96，D構(gòu)型氨基酸的衍生效率為0.87-0.99，總體上探針D-BPBr對手性氨基酸的衍生效率較高，可以很好地對其進行衍生分析。

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文2一種手性醛探針對蛋白氨基酸的定量分析24有較強堿性側(cè)鏈的氨基酸(Lys)、某些酸性側(cè)鏈的氨基酸(Glu，Asp)和帶有活性基團的氨基酸(Cys)。圖2.514對D-BPBr標(biāo)記的手性氨基酸和Gly在反相C18HPLC分離的MRM色譜圖。對于每對手性氨基酸衍生產(chǎn)物，第一個峰是標(biāo)記的L構(gòu)型氨基酸產(chǎn)物，第二個峰是指相應(yīng)D構(gòu)型氨基酸產(chǎn)物。Leu和Ile的產(chǎn)物峰在圖中進行了標(biāo)記。此外，探針D-BPBr也顯示出對D構(gòu)型氨基酸更強的手性選擇性，可在質(zhì)譜分析中表現(xiàn)出更強的質(zhì)譜信號。我們配制了相同濃度的D型和L型氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品，并計算衍生后的D構(gòu)型氨基酸產(chǎn)物與L構(gòu)型氨基酸產(chǎn)物的峰面積之比，測量了這14個氨基酸對映體對的手性選擇性(Cs)值。結(jié)果顯示，探針B-BPBr對這14對手性氨基酸的Cs值在1.31至12.87之間（表2.3），表明該探針具有良好的手性選擇性。探針D-BPBr對側(cè)鏈具有堿性芳香族的D構(gòu)型氨基酸（如His和

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]丹磺酰氯柱前衍生發(fā)芽糙米中γ-氨基丁酸的HPLC分析[J]. 周婷,程威威,林親錄,吳躍,丁玉琴,王曉映.  食品科技. 2014(01)



本文編號：3051921