利用DNAzyme及核酸外切酶Ⅲ（ExoⅢ）構(gòu)建了熒光生物傳感器用于檢測鉛離子(Pb²⁺)。DNAzyme與底物探針結(jié)合并在Pb²⁺輔助作用下切割底物,使發(fā)夾結(jié)構(gòu)的底物探針在環(huán)上修飾有RNA堿基處斷裂,切割斷裂底物探針后,DNAzyme被釋放,繼續(xù)與下一個(gè)底物探針結(jié)合并切割,利用DNAzyme可循環(huán)反復(fù)催化裂解底物的特性實(shí)現(xiàn)循環(huán)反應(yīng)。底物探針被切割斷裂后,形成的Y字形探針可與信標(biāo)探針結(jié)合并打開其發(fā)夾結(jié)構(gòu),產(chǎn)生熒光信號,同時(shí)在ExoⅢ的作用下降解,從3′端開始切割水解被打開的信標(biāo)探針,釋放出底物探針,繼續(xù)與下一個(gè)信標(biāo)探針結(jié)合切割,形成第二步的循環(huán)信號放大。經(jīng)過兩步的循環(huán)反應(yīng),熒光信號得到不斷增強(qiáng),從而達(dá)到高靈敏檢測的目的。200μL反應(yīng)體系在37℃反應(yīng)60 min后,其熒光信號與Pb²⁺濃度在0.05～200 nmol/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢出限為0.01 nmol/L。用于實(shí)際樣品中Pb²⁺的檢測,加標(biāo)回收率為96.3%～108.3%。本方法具有簡單、快速、高選擇性、高靈敏的特點(diǎn),在Pb

【文章來源】：分析化學(xué). 2020,48(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

基于DNAzyme及Exo Ⅲ輔助循環(huán)放大策略構(gòu)建的鉛離子熒光傳感器示意圖

發(fā)夾結(jié)構(gòu)的信標(biāo)探針中堿基的雜交個(gè)數(shù)對于整個(gè)反應(yīng)體系熒光信號的產(chǎn)生有重要影響,因此首先對信標(biāo)探針序列進(jìn)行了優(yōu)化,結(jié)果見圖3。信標(biāo)探針中堿基雜交個(gè)數(shù)過多,會(huì)造成底物形成的Y型探針與之結(jié)合困難,熒光信號降低;信標(biāo)探針堿基雜交個(gè)數(shù)較少,會(huì)造成整個(gè)體系的背景信號偏高。由圖3可見,當(dāng)信標(biāo)探針中堿基雜交個(gè)數(shù)為12時(shí)結(jié)果最優(yōu)。圖3 信標(biāo)探針堿基雜交個(gè)數(shù)優(yōu)化

信標(biāo)探針堿基雜交個(gè)數(shù)優(yōu)化


本文編號：3034031