目前,肽和蛋白質(zhì)在液-固界面上的色譜保留機(jī)理研究仍然是生物醫(yī)學(xué)、生物工程相關(guān)的分離科學(xué)領(lǐng)域的前沿和熱點課題。反相液相色譜已被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究、治療肽的分離分析中。但是,在肽的分析中,重疊峰的出現(xiàn)、色譜峰不規(guī)律問題還一直沒有得到解決。傳統(tǒng)分離純化蛋白質(zhì)中通常采取先沉淀,隨后再進(jìn)行液相色譜分離的方法,存在耗時較長,回收率較低。在所有的一維、二維液相色譜分離中,都需要提高選擇性,尋找差異性,最大化的提高分離空間。不同于小分子化合物,多肽和蛋白具有三維空間結(jié)構(gòu),它們在色譜中的保留行為差別很大。本論文較系統(tǒng)地研究了液-固界面上6種三肽、2種寡肽和4種多肽在反相液相色譜上的“停滯-遷移”雙保留行為和雙保留機(jī)理。進(jìn)一步探討了蛋白質(zhì)在疏水相互作用色譜中的保留行為和熱力學(xué)性質(zhì)。這些研究對實際應(yīng)用中靶向肽和蛋白質(zhì)藥物的工業(yè)化生產(chǎn)也具有實際應(yīng)用價值。本文主要研究了肽和蛋白質(zhì)在色譜中的雙保留機(jī)理,主要內(nèi)容如下:1.文獻(xiàn)綜述。通過引用156篇文獻(xiàn),對液相色譜分離肽和蛋白質(zhì)的研究進(jìn)展、液相色譜中溶質(zhì)的保留模型、保留模型與保留行為的關(guān)系以及計量置換理論模型與應(yīng)用做了介紹和綜述。2.反相液相色譜梯度洗脫下肽的... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

色譜中QSRR的研究目標(biāo)Figure1.1ResearchgoalsofQSRRinChromatography近年來，隨著量子化學(xué)和計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展，QSRR在色譜理論研究領(lǐng)域較為活

圖 2.1 三肽的平面結(jié)構(gòu)Figure 2.1 Molecular structures of tripeptides表 2.1 chemdraw 模擬 6 種三肽的結(jié)構(gòu)參數(shù)*Table 2.1 Structure parameters of tripeptide from Chemdraw*peptides 3 肽-1 3 肽-2 3 肽-3 3 肽-4 3 肽-5 3 肽-6Boiling Point（K） 1103.73 1103.75 1132.71 1103.75 1103.75 1103.75Meleting Point（K） 745.30 945.30 829.02 945.30 945.30 945.30Critical Temp(K) 1120.67 1120.67 1017.76 1120.67 1120.67 1120.67Critical Pres(Bar) 37.04 37.04 35.01 37.04 37.04 37.04Critical Vol (cm3/mol) 770.50 770.50 748.50 770.50 770.50 770.50Gibbs Energy (kJ/mol) -681.70 -681.70 -751.54 -681.70 -681.70 -681.70Log P -3.23 -3.23 -2.64 -3.23 -3.23 -3.23MR (cm3/mol) 69.56 69.56 66.26 69.56 69.56 69.56Henry′s Law 27.80 27.80 24.40 27.80 27.80 27.80Heat of Form(kJ/mol) -1112.98 -1112.98 -1113.35 -1112.98 -1112.98 -1112.98

圖 2.2 RPLC 中非同步進(jìn)樣的三肽色譜圖（左）和保留時間（tR）對進(jìn)樣時間（ti）作圖（右）Figure 2.2 The chromatograms of tripeptides with different injection time on RPLC and itscorresponding plot of retention vs sampling time色譜柱：Galaksi EF-C18M 商品柱，250×4.6 mm I.D.，粒徑 5μm 粒徑，孔徑 120 ；流動相 A：水+0.1%TFA，流動相 B：乙腈+0.1%TFA ；流速：1.0 mL min-1；檢測波長：254nm；梯度洗脫：30 min 內(nèi)從 0%B-50%B；肽順序為 A.3 肽-1; B. 3 肽-2; C.3 肽-3; D. 3 肽-4; E.3 肽-5; F. 3 肽-6.2.5.2 RPLC 中三肽遷移過程的臨界遷移時間由 2.5.1 中實驗發(fā)現(xiàn)，在三肽“停滯-遷移”保留現(xiàn)象中，存在一個臨界遷移點將色譜過程分為兩部分，肽的保留時間（tR）和進(jìn)樣時間（ti）作圖，可明顯看出整個色譜保留分成了直線部分 SR 和曲線部分 MR。因此，停滯部分 SR 與遷移部分 MR。之間肯定存在著一個臨界遷移時間 (critical migration time point, TCMP），同時通過這個臨界點可以計算出臨界遷移濃度（critical migration concentration point，CCMP），即溶質(zhì)發(fā)生遷移的濃度。在臨界遷移濃度 CCMP，可以認(rèn)為三肽在色譜柱上的遷移速度為 0，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]生物大分子的混合模式色譜法——傳統(tǒng)的色譜觀點正在被改變[J]. 耿信篤.  色譜. 2012(01)
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[6]活性蛋白液相色譜快速分離新方法[J]. 柯從玉,耿信篤.  科學(xué)通報. 2008(05)
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博士論文
[1]應(yīng)用計量置換理論對親水相互作用色譜中溶質(zhì)保留機(jī)理的研究[D]. 王菲.西北大學(xué) 2015
[2]液固界面上蛋白質(zhì)遷移規(guī)律研究[D]. 劉鵬.西北大學(xué) 2009

碩士論文
[1]二肽在反相色譜中的“靜—動”保留機(jī)理[D]. 牛瑞娟.西北大學(xué) 2014
[2]在線單柱二維液相色譜從牛胰腺粗提液中快速純化胰島素[D]. 楊云.西北大學(xué) 2011
[3]蛋白質(zhì)和芳香醇同系物在疏水色譜中保留的熱力學(xué)研究[D]. 趙建國.西北大學(xué) 2002



本文編號：2927124