發(fā)布時間：2020-12-04 01:32

　　本文建立了一種新型的基于核酸適配體的試紙條快速檢測技術(shù),并首次用于水中的黃曲霉毒素B1的檢測,該技術(shù)的實現(xiàn)主要基于黃曲霉毒素B1和DNA探針對適配體的競爭反應(yīng)。核酸適配體是人工合成的單鏈DNA或RNA,能與多種物質(zhì)特異性結(jié)合且特異性強,利用核酸適配體代替?zhèn)鹘y(tǒng)膠體金側(cè)流免疫層析技術(shù)中的抗原抗體,可以使試紙條快速檢測技術(shù)的應(yīng)用范圍更廣,靈敏度更高;納米金粒子在大量聚集時呈現(xiàn)紅色,肉眼可見,即可以實現(xiàn)試紙條的現(xiàn)場實時檢測。（1）納米金粒子的制備和納米金粒子與核酸適配體的偶聯(lián)。本實驗通過Frens法制備納米金粒子,考察了轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時間和還原劑添加量,并利用紫外光譜法、透射電子顯微鏡等手段進行納米金粒子的表征。核酸適配體末端修飾巰基,巰基可以與納米金粒子形成共價鍵,在納米金粒子與核酸適配體偶聯(lián)時利用檸檬酸三鈉并調(diào)節(jié)pH的方法,將偶聯(lián)的時間從使用氯化鈉陳化的1-2天縮短為3-4個小時,并利用熱重分析核酸適配體在納米金粒子表面上的連接量在7 wt%左右。（2）試紙條優(yōu)化并檢測黃曲霉毒素B1。本試驗考察了納米金-核酸適配體添加量、封閉劑、硝化纖維膜和鏈霉親和素的種類,并通過免疫色譜讀取儀測定吸光度,最... 

【文章來源】：北京化工大學北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

一核酸適配體篩選流程

？?３＾?Ｗ＂??Ｗ?ｍ??圖１－２核酸適配體篩選流程??Ｆｉｇ．?１－２?Ａａｐｔａｍｅｒ?ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ?（ＳＥＬＥＸ）?ｐｒｏｃｅｓｓ??３??

?凝血酶?可卡因?赭曲靈毒素??圖１－３核酸適配體的目標物??Ｆｉｇ．?１－３?Ａｐｔａｍｅｒ?ｔａｒｇｅｔｓ??１．２．３核酸適配體的應(yīng)用??由于核酸適配體可以和多種物質(zhì)發(fā)生結(jié)合并相互作用，近年來利用核酸適配體和納米材??料組合，各種基于核酸適配體的生物測定包括熒光，比色和電化學等方法已經(jīng)開發(fā)并且廣泛??地用于令人印象深刻的多種臨床，醫(yī)學，環(huán)境監(jiān)測應(yīng)用和食品分析［２３＿２５］。核酸適配體連接熒??光分子組成熒光傳感器，連接納米金粒子組成比色傳感器［２６］，和鏈霉親和素的芯片相連組成??電化學傳感器。作為一個小尺寸的非免疫原性分子，適配體和其官能產(chǎn)品己廣泛用于靶向藥??物遞送，分子診斷，成像和臨床實踐中的跟蹤系統(tǒng)，生物傳感器系統(tǒng)，及生物標志物發(fā)現(xiàn)［２７］。??Ｒｉｃｈａ等人總結(jié)了核酸適配體傳感器在食品檢測方面的應(yīng)用［２８］。??４??


本文編號：2896797