發(fā)布時(shí)間：2020-07-10 05:54

【摘要】：真菌毒素是一類由真菌產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物,可致癌、致畸、致突變。真菌毒素可污染“農(nóng)田到餐桌”的任一環(huán)節(jié),防控難度大。由于我國農(nóng)業(yè)環(huán)境氣候差異大,真菌毒素混合污染的情況頻繁發(fā)生,且多毒素聯(lián)合毒性強(qiáng),嚴(yán)重威脅人民群眾生命健康�，F(xiàn)場快速檢測技術(shù)是農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素全程監(jiān)管的重要技術(shù)手段,現(xiàn)有真菌毒素快速檢測ELISA法、試紙條法等需要復(fù)雜的分離、洗滌等步驟,且多僅能用于單一毒素的檢測,難以滿足真菌毒素簡便前處理以及混合污染現(xiàn)場同步檢測的需求。因此,亟需建立真菌毒素快速簡便檢測技術(shù)。針對以上問題,我們研究建立了三種快速簡便的免疫分析方法。主要研究內(nèi)容和創(chuàng)新點(diǎn)如下:1.研究建立了黃曲霉毒素B_1熒光共振能量轉(zhuǎn)移免疫分析方法,無需任何分離步驟,簡便、易操作,滿足黃曲霉毒素B_1快速簡便的檢測需求�；跓晒夤舱衲芰哭D(zhuǎn)移、膠體金的熒光猝滅特性以及競爭免疫反應(yīng),根據(jù)熒光值變化實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素B_1定量檢測。將膠體金作為熒光猝滅基團(tuán)及抗體標(biāo)記的支架,根據(jù)抗原抗體特異性反應(yīng),猝滅抗原上的羧基熒光素。該方法線性范圍為10.0-60.0 nmol/L,檢測限為8.6 nmol/L。該方法為均質(zhì)檢測,整個檢測過程可以在同一個試管中完成,無需任何洗滌、分離,簡化了操作步驟,可以廣泛應(yīng)用于黃曲霉毒素B_1的現(xiàn)場檢測。2.研究建立了黃曲霉毒素B_1 DNA誘導(dǎo)組裝熒光檢測技術(shù),顯著降低了熒光背景值,首次實(shí)現(xiàn)真菌毒素等小分子DNA誘導(dǎo)組裝熒光檢測。結(jié)合DNA誘導(dǎo)組裝技術(shù)、膠體金熒光猝滅特性和競爭免疫反應(yīng),建立DNA誘導(dǎo)組裝熒光檢測技術(shù)。該研究通過設(shè)計(jì)識別元件和信號元件,實(shí)現(xiàn)了DNA誘導(dǎo)組裝技術(shù)在真菌毒素等小分子檢測中的應(yīng)用。該方法檢測限為2.3 nmol/L,線性范圍為5.0-50.0 nmol/L。將該方法應(yīng)用于大米實(shí)際樣品中黃曲霉毒素B_1的檢測,加標(biāo)回收率為86.2%-101.6%。對熒光基團(tuán)和猝滅基團(tuán)之間的距離進(jìn)行理論估算,結(jié)果表明與傳統(tǒng)免疫熒光檢測相比,該方法大大縮短了兩者之間的距離,降低了約38%的熒光背景,提高了靈敏度。3.研究建立了真菌毒素混合污染多色免疫層析同步檢測技術(shù),實(shí)現(xiàn)三種真菌毒素混合污染的同步檢測。研制出能夠同時(shí)檢測三種真菌毒素的多色同步免疫層析試紙條。利用不同顏色的微球標(biāo)記不同的單克隆抗體,在三條檢測線上分別固定黃曲霉毒素B_1、T-2和玉米赤霉烯酮抗原,利用競爭免疫反應(yīng)實(shí)現(xiàn)三種毒素的同步檢測,其可視檢測限分別為1.6、64.2、6.3 nmol/L。三種毒素之間無交叉反應(yīng),試紙條特異性好。該方法在玉米和飼料樣品中的檢測結(jié)果與HPLC-MS/MS分析結(jié)果具有良好的一致性。該方法僅通過辨別檢測線顏色即可實(shí)現(xiàn)三種真菌毒素的半定量檢測,操作簡便、成本低。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：O657.3;TS207.5
【圖文】：

學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 引 言毒素的危害素（mycotoxin）是由真菌（fungal）產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物。常見的產(chǎn)菌（Aspergillus）、青霉屬真菌（Penicillium）和鐮刀菌屬真菌（Fusarium）目前，已知的真菌毒素有 300-400 種，常見的真菌毒素有黃曲霉毒素、玉米和 T-2 毒素等。這些毒素可以在種植、收獲、儲存、加工和運(yùn)輸?shù)热我浑AEletal.2011）。真菌毒素具有極強(qiáng)的毒性，如致癌、致畸、致突變、抑制免于食品添加劑和農(nóng)藥殘留，嚴(yán)重影響人類和動物健康，甚至威脅生命（Zheal.2007）。真菌毒素在食物鏈中的影響和危害如圖 1.1 所示。一方面，真菌接污染農(nóng)產(chǎn)品；另一方面，真菌毒素污染的農(nóng)產(chǎn)品被動物攝入，在動物體內(nèi)康并間接污染動物性食品（如奶制品等）。真菌毒素污染的植物性食品或膳食影響人體健康。真菌毒素污染引發(fā)的召回及下架，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 引言成，促進(jìn)了黃曲霉毒素毒理學(xué)和代謝的相關(guān)研究。1977 年，科研工作者完成了 AFT-DNA 加成物的結(jié)構(gòu)鑒定，并于 1981 年在小鼠尿液中發(fā)現(xiàn)了 AFT-DNA 加成物。隨后，在抗黃曲霉毒素單克隆抗體合成的基礎(chǔ)上，研究建立了尿液中 AFT-DNA 加成物的檢測方法。該 DNA 加成物的檢測為黃曲霉毒素分子流行病學(xué)的研究提供了有效的工具。在中國和非洲撒哈拉以南地區(qū)有關(guān)黃曲霉毒素分子流行病學(xué)的研究結(jié)果，為黃曲霉毒素被劃分為 1 類致癌物提供了科學(xué)依據(jù)。

霉烯酮（zearalenone,ZEN）主要是由鐮刀菌屬（Fusarium）產(chǎn)生的一種類赤霉病的玉米中分離得到的，它可以污染玉米、小麥、大麥、燕麥和 et al. 2012）。玉米赤霉烯酮為白色晶體，熔點(diǎn)為 164℃-165℃，不溶于醚、苯、氯仿等各種有機(jī)溶劑。玉米赤霉烯酮具有良好的熱穩(wěn)定性，在。霉烯酮是一類非甾體雌激素，因?yàn)楹痛萍に亟Y(jié)構(gòu)相似，它具有很強(qiáng)的生殖類和動物健康。結(jié)構(gòu)上玉米赤霉烯酮像人工合成的雌激素，可以與真正動物體內(nèi)的雌激素受體，從而改變生殖器內(nèi)部或者外部結(jié)構(gòu)，影響人類或玉米赤霉烯酮還具有一定的基因毒性、免疫毒性、細(xì)胞毒性、遺傳毒性ssema et al. 2007; Bakos et al. 2013; Cai et al. 2012; Gao et al. 2016; Gaum玉米赤霉烯酮在哺乳動物體內(nèi)的代謝途徑（MartinaKleinovaetal.2002edine et al. 2007）。在 3α-和 3β-羥基-類固醇脫氫酶的催化下，羥基化反米赤霉酮中的羰基還原為羥基，玉米赤霉烯酮轉(zhuǎn)化為 α-和 β-玉米赤霉烯可以在牛和羊體內(nèi)進(jìn)行更進(jìn)一步的還原，通過尿液排至體外。因此可以醇；如在豬的尿液和肌肉組織中可以明確檢測到玉米赤霉醇。對玉米赤同動物組織中的研究，可以用來指導(dǎo)人類營養(yǎng)學(xué)。

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本文編號：2748538