【摘要】：許多酚類化合物跟人們的生活息息相關(guān),以多巴胺為例,其作為體內(nèi)一種非常重要的神經(jīng)遞質(zhì),它含量的多少直接跟很多疾病相關(guān),如帕金森癥。故對于多巴胺含量的檢測非常有必要。傳統(tǒng)的酚類化合物檢測通常采用UV-Vis法,或者HPLC法等,這些方法通常存在檢測限高,費(fèi)時費(fèi)力等缺點(diǎn)。相對于傳統(tǒng)檢測法,基于量子點(diǎn)的熒光傳感器具有,靈敏度高,檢測限低,操作相對簡單等優(yōu)點(diǎn)。本研究利用一種多酚氧化酶漆酶及硫化鎘量子點(diǎn)制備成熒光傳感器,以酚類化合物多巴胺為檢測物進(jìn)行了檢測,達(dá)到了良好的檢測效果,即較低的檢測限和良好的回收率,實(shí)現(xiàn)了方便快捷檢測低濃度多巴胺的目的。本研究為開發(fā)一種用于檢測酚類化合物多巴胺的方法,利用多酚氧化酶漆酶及生物合成的硫化鎘量子點(diǎn),制備出了可檢測多巴胺濃度的熒光傳感器,此方法相對于傳統(tǒng)的紫外檢測法,液相檢測法具有更低檢測限,更省時省力,方便快捷等優(yōu)點(diǎn)。主要結(jié)論如下:(1)利用白腐真菌云芝,在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中以1mM銅離子為誘導(dǎo)劑,于發(fā)酵第九天獲得了最大酶活1071±21 U/L。發(fā)酵粗酶液經(jīng)30%-80%硫酸銨分級沉淀、透析及DEAE-Sepharose FF柱層析之后,純化了31倍,且比活達(dá)到了165.5U/mg,經(jīng)SDS-PAGE知得到了較純漆酶且分子量為60kDa左右。并進(jìn)一步對純化后漆酶進(jìn)行了常規(guī)的酶學(xué)性質(zhì)表征,結(jié)果表明其最適pH為2,最適溫度為35℃,常溫偏酸性環(huán)境下酶活穩(wěn)定。(2)利用白腐真菌云芝吸附重金屬自組裝量子點(diǎn)的特性,首先在Kirk培養(yǎng)基中培養(yǎng)出云芝菌絲球,并通過添加60mg硝酸鎘,5mL 0.07mg/L的硫代乙酰胺,0.5 mL巰基乙酸,將Kirk培養(yǎng)基pH調(diào)至10,經(jīng)反應(yīng)24h后獲得了熒光納米材料硫化鎘量子點(diǎn)。然后利用掃描電子顯微鏡(SEM),紫外-可見(UV-Vis)和光致發(fā)光(PL)光譜,傅里葉變換紅外光譜(FTIR),熱重(TG),透射電子顯微鏡(TEM)及X射線衍射(XRD)證實(shí)了納米顆粒的表面形態(tài),光學(xué)和熱學(xué)特性,晶體性質(zhì),尺寸和形狀分布,并且對生物合成量子點(diǎn)的合成機(jī)理進(jìn)行了闡述。(3)將所獲得的漆酶及量子點(diǎn)構(gòu)建成了傳感器體系,在7-100μM范圍內(nèi)做出了P_0/P對[DA]的校準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)(R~2)為0.9904,檢測限(LOD)為7μM。并對已知濃度的多巴胺進(jìn)行了回收實(shí)驗(yàn),回收標(biāo)準(zhǔn)偏差在6%以內(nèi)。成功構(gòu)建了檢測多巴胺的漆酶-量子點(diǎn)生物傳感器。
【圖文】：

如它無需額外的輔助因子，在分子氧的存在下氧化酚合物，而且具有催化電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)能力的良好穩(wěn)定性[19]。漆酶生多重要領(lǐng)域用于測定酚類化合物，，如臨床，生物醫(yī)藥，環(huán)境污染析等。生物傳感器在諸多重要領(lǐng)域所測定的酚類化合物中，對于多巴胺研究的熱點(diǎn)。多巴胺（DA, dopamine ），化學(xué)名稱為 4-(2-氨基乙(2-aminoethyl)benzene-1,2-diol)，是由動物下丘腦和腺垂體共同分胺類的神經(jīng)遞質(zhì)，由一個苯環(huán)基團(tuán)連接一條乙胺側(cè)鏈和兩個相鄰本結(jié)構(gòu)式如圖 1.1 所示。多巴胺主要在動物細(xì)胞的脈沖傳遞中發(fā)揮知能力、情感調(diào)節(jié)等行為都與其關(guān)系密切。多巴胺是腎上腺素等物質(zhì)，同時也是哺乳動物中樞神經(jīng)元之間信息傳遞的主要物質(zhì)。人的情感，神經(jīng)系統(tǒng)中多巴胺的濃度會受到人情緒方面波動的影的激素和多巴胺之間存在著密切聯(lián)系，且分泌功能可以被多巴胺神狀態(tài)和生理狀態(tài)時刻受著體內(nèi)各種激素的調(diào)控，多巴胺就是其之一[20]。

圖 1.2 云芝 50001 平板形態(tài)性和催化機(jī)理下，真菌漆酶具有 60-80 kDa 的分子量和 4-7 的等電四個銅原子簇（I 型銅；II 型銅和兩個 III 型銅原子）原子被分為三組，這取決于通過 UV/可見光和電子順I(yè) 型銅（T1，由至少一個半胱氨酸和兩個組氨酸綁定約 600nm 處具有較強(qiáng)的電子吸收并且是 EPR 可測的定）雖然在可見光譜中并無吸收（無色），但卻顯示出可T3，每個由三個組氨酸綁定）由一對反鐵磁耦合的銅 nm 有弱吸收（氧化形式），并沒有 EPR 信號[45,48]。結(jié)合（如疊氮和氟），觀察對漆酶的 EPR 譜的擾動，2 的 EPR 信號的強(qiáng)度干擾[49,50]。T2 和 T3 銅原子形成原和水的釋放[45,48]。和對位酚基團(tuán)的活性，包括單，雙和聚酚類、氨基酸
【學(xué)位授予單位】：齊魯工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：TP212.3;O657

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本文編號：2642131