【摘要】：將離子液體2,5-二羥基苯甲酸丁胺用于改進基質輔助激光解吸電離質譜分析寡糖的定量重復性,并進一步用于大豆和豆葉中寡糖的質譜成像研究。實驗中設定正電荷檢測模式、激光能量為70%,采用將離子液體2,5-二羥基苯甲酸丁胺甲醇溶液(20%,V/V)直接覆蓋樣品的簡單加基質方法,分析寡糖樣品及大豆和豆葉寡糖分布的質譜成像。結果表明,離子液體2,5-二羥基苯甲酸丁胺作為基質,用基質輔助激光解吸電離化質譜分析蔗糖、棉子糖、水蘇糖3種寡糖樣品,點內重復性RSD3%,點間重復性RSD4%,在0.062～1.00 mg/m L范圍內測定的線性相關系數R~2≥0.996,顯示出較好的定量分析潛力。將此基質用于基質輔助激光解吸電離質譜成像分析大豆切片和豆葉表面的二糖、三糖和四糖,得到空間分辨率為150μm的3種寡糖質譜成像圖。3種寡糖在大豆中大致均衡分布,在豆葉的分布均以葉尖為多,并且根據標準曲線和圖中的信號強度可以估計其含量。
【圖文】：

軟件中設置采集參數見表1。成像結果由HystarVersion3．4(Build8))軟件處理得到。圖1大豆成像的過程示意圖Fig．1Illustrationdiagramofsoybeanmatrix-assistedlaserdesorption/ionizationmassspectrometry(MALDI-MS)imaging表1實驗中基質輔助激光解吸-質譜分析主要參數Table1Parameterofmatrix-assistedlaserdesorption/ionizationmassspectrometryandimagingintheexperimentMS采集參數Acquisitionparameters分析模式Acquisitionmode最低分子量Broadbandlowmass激光能量Laserpower基質輔助激光解吸離子化MALDIm/z101．170%極性Polarity分辨率Ｒesolution激光斑點大小LaserFocus正離子Positive逍逍逍逍逍逍2M小Small成像采集參數Imagingacquisitionparameters步長Ｒasterwidth150μm分辨率Ｒesolution1M3結果與討論3．1MALDI-MS實驗條件的影響選用葡萄糖(單糖)、蔗糖(二糖)、棉子糖(三糖)、水蘇糖(四糖)、β-環(huán)糊精(七糖)作為寡糖樣品。樣品濃度均為0．5mg/mL。考察了不同基質類型、基質溶液濃度、基質溶液與樣品溶液用量比、激光能量、點樣方法等對測試的影響。用2，5-二羥基苯甲酸(DHB)分別與吡啶、苯胺、N，N-二甲基苯胺、正丁胺合成了4種離子液體基質。用于3種寡糖樣品測定時均有響應，其中DHB與正丁胺形成的離子液體DHB-BuN作為基質對3種寡糖的響應均較好。因此，選擇DHB-BuN作為進一步研究的基質。考察DHB-BuN甲醇溶液濃度分別在14%～50%(V/V)時的MALDI-MS點樣效果，，在DHB-BuN濃度低于20%(V/V)時，溶液在靶板上能均勻鋪展，不易聚集，得到均勻且薄的基質點。但降低濃度，信噪比也會下降。故DHB-BuN甲醇溶液濃度選擇20%(V/V)。以蔗糖為樣品，考察在基質溶液與樣品溶液的用量(DHB-BuN∶蔗糖)分

仗欠直鷯牖馇駛?合，在以上MALDI-MS條件下，分別用離子液體基質DHB-BuN和固體基質DHB測試樣品，比較兩者的重復性。在比較點內(In-spot)重復性時，按照九宮格的形式，將1個點分成大致9個區(qū)域，然后手動將激光束聚焦在每個區(qū)域的位置上，采集質譜數據。選擇［M+Na］+峰為重復性數據的目標峰，每個區(qū)域的數據是重復采集區(qū)內不同位置的5次樣品信號強度的平均值(采用DHB-BuN時，ＲSD＜6%;采用DHB時，ＲSD＜15%)。點間(Spot-to-spot)的重復性是測定6個不同樣品點的結果，在每個樣品點中間區(qū)域的不同位置采集5次數據的平均值。由圖2可見，采用DHB-BuN基質測定的點內峰強度ＲSD＜3%，點間ＲSD＜4%，可較好地進行定量分析和成像研究。采用MALDI-MS成像方法測定靶上樣品在不同區(qū)域的信號強度分布，靶點的光學圖像和MS成像如圖3所示。從DHB基質的光學圖像(A)可以看到產生了結晶，而DHB-BuN做基質時的光學圖像(D)中可以看到DHB-BuN仍然以液體狀態(tài)存在。在質譜儀高倍放大鏡頭下的分布見圖3B和3E。MALDI-MS成像的方法測定靶上樣品在不同區(qū)域的信號強度分布見圖3C和3F。采用DHB-BuN基質時的信號強度分布明顯比DHB為基質時樣品信號強度分布更均勻，這與文獻［34］和圖2的結果一致。圖2使用不同基質測定寡糖樣品MS峰強度重復性Fig．2Ｒeproducibilitycomparisonofoligosaccharidesusingdifferentmatrices3．3質譜信號強度與樣品濃度間的(線性)關系分別將6種不同濃度的(0．062～1．000mg/mL)蔗糖、棉籽糖、水蘇糖樣品與基質混合超聲超1min，再用旋渦混合2min，使基質和分析物充分混勻。用移液槍分別取1μL各濃度混合溶液，分別點在靶板上，MALDI-MS測定質譜峰強度。測定樣品濃度與［M+Na］+峰強度的線性關系(圖4)，其中每個濃度的峰強度同樣是重復采集5次數據求?
【作者單位】： 上海應用技術大學化學與環(huán)境工程學院;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(No.31671928) 上海市自然科學基金項目(No.15ZR1440800)資助~~
【分類號】：O657.63;TS214.2

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本文編號：2549198