【摘要】：化療仍然是癌癥治療的主要策略之一。然而,非靶向的化療藥物會(huì)在全身蓄積,對(duì)正常的體細(xì)胞造成極大的損害。靶向藥物傳遞系統(tǒng)(targeting drug delivery system,TDDS)作為一種新的給藥手段,在抗腫瘤藥物傳遞中顯示出良好的成效。針對(duì)納米粒給藥系統(tǒng)的靶向配體功能化可以增強(qiáng)藥物的選擇性,減少藥物的用量以及增加腫瘤部位的血藥濃度,具有巨大的應(yīng)用前景。納米載體如何在特定的腫瘤組織和細(xì)胞中釋放藥物是納米體系有效應(yīng)用所面臨的又一突出問題。用刺激響應(yīng)性材料制備成的納米系統(tǒng)具有優(yōu)異性能,他們可以繞過生物屏障以實(shí)現(xiàn)有針對(duì)性的細(xì)胞內(nèi)藥物傳遞。其中,pH響應(yīng)性的納米粒作為藥物輸送載體用于腫瘤治療倍受關(guān)注。本文制備了同時(shí)具有靶向功能以及pH響應(yīng)性能的TDDS,并對(duì)此遞藥體系的理化特性及抗腫瘤效果進(jìn)行了研究。論文的主要研究工作如下:1.載體的合成與表征:采用邁克爾加成反應(yīng)制備了聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)和聚(β-氨基酯)(poly(β-amino esters),PAEs)的兩親性嵌段共聚物(PEG-PAEs)。核磁共振氫譜(1H-NMR)、凝膠滲透色譜(gel-permeation chromatography,GPC)及氣相色譜(gas chromatography,GC)驗(yàn)證結(jié)果表明,我們成功合成了PEG-PAEs,平均分子量為9237 Da,多分散系數(shù)為1.19,有機(jī)殘留量符合藥典規(guī)定。2.載藥膠束的制備與表征:通過透析法制備了空白膠束(blank micelles,BMs)與包載阿霉素(doxorubicin,DOX)的單載納米粒(PEG-PAEs/DOX nanoparticles,PDNs),靜電吸附法制備了包載DOX與核酸適配體(aptamer,Apt)的共載納米粒(PEG-PAEs/DOX/Apt nanoparticles,PDANs)。BMs的臨界膠束濃度為6.3μg/m L,且具有良好的pH響應(yīng)性;PDANs的粒徑分布均勻,分散性良好,平均粒徑和Zeta電位分別為183.1±27.2 nm和+31.2±6.3 m V,Apt與PDNs結(jié)合牢固;載藥性能考察結(jié)果表明,DOX的載藥量和包封率較高,分別為9.81%和75.19%;體外釋放結(jié)果表明,隨著pH的下降,藥物的累計(jì)釋放率逐漸增加,顯示了pH依賴的釋放性能。3.生物相容性研究:從細(xì)胞水平以及動(dòng)物水平對(duì)載體材料的生物相容性進(jìn)行研究。采用溶血試驗(yàn)以及CCK-8法考察了BMs的溶血性能及細(xì)胞毒性,結(jié)果表明,在用藥濃度范圍內(nèi),材料無溶血作用,且細(xì)胞毒性等級(jí)為0或1級(jí),具有良好的生物相容性;小鼠的全身急性毒性實(shí)驗(yàn)表明,BMs對(duì)小鼠無明顯急性毒性作用。4.靶向性能與抗癌效果研究:從細(xì)胞水平以及分子水平對(duì)PDANs的靶向性能及抗癌效果進(jìn)行研究。藥物細(xì)胞內(nèi)的分布情況表明,藥物作用4 h后即可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),且藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于在正常細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度,顯示了良好的靶向功能性;細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化結(jié)果表明,經(jīng)載體負(fù)載的藥物可以更有效地促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡進(jìn)程;體外抑瘤效果結(jié)果表明,PDANs組在低濃度下即可顯示出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性,并且對(duì)腫瘤細(xì)胞有較好靶向功能性;細(xì)胞周期分布結(jié)果表明,PDNs和PDANs作用后使腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期滯留于G0/G1后期;熒光定量PCR結(jié)果表明,PDANs抑制了Bcl-2 m RNA的表達(dá),發(fā)揮了明顯的基因治療效果。綜上所述,這種具有主動(dòng)靶向功能以及pH響應(yīng)性能的納米粒子有望作為新型的TDDS,應(yīng)用于乳腺癌的靶向治療領(lǐng)域。
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【學(xué)位授予單位】：華僑大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O631;TQ460.1
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本文編號(hào)：2373006