【摘要】：右旋糖酐是蔗糖經(jīng)右旋糖酐蔗糖酶催化聚合成的一種天然微生物活性多糖,不同分子量及結(jié)構(gòu)的右旋糖酐被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品及化工等領(lǐng)域中。重均分子量(Mw)為104Da～105Da的右旋糖酐可作為代血漿,具有擴(kuò)增血容量、降低血液黏度及抗凝血等功能。小分子量右旋糖酐(Mw104 Da)可作為高附加值的益生元,添加到保健品中。傳統(tǒng)上,采用的“菌種發(fā)酵-酸水解-乙醇分級(jí)沉淀”制備特定分子量藥用右旋糖酐的方法存在操作繁雜、產(chǎn)品質(zhì)量較差且容易引發(fā)臨床副反應(yīng)等諸多可以改善的地方。酶法耦合兩級(jí)膜制備右旋糖酐具有提高產(chǎn)物均一性、簡(jiǎn)化下游產(chǎn)物分離純化等優(yōu)點(diǎn)。本課題通過(guò)單酶法(右旋糖酐蔗糖酶)耦合兩級(jí)膜探索右旋糖酐的聚合機(jī)理;雙酶法(右旋糖酐蔗糖酶和右旋糖酐酶)耦合兩級(jí)膜實(shí)現(xiàn)對(duì)特定分子量及分布的右旋糖酐的調(diào)控與定向制備。主要的研究?jī)?nèi)容和結(jié)果摘要如下:(1)建立HPGFC雙柱串聯(lián)法跟蹤檢測(cè)產(chǎn)物右旋糖酐分子量、定量檢測(cè)蔗糖消耗量、葡萄糖和果糖量的變化。通過(guò)對(duì)比KS-801、KS-805單柱及雙柱串聯(lián)條件下對(duì)系列右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)品的分離效果,初步確定了 KS-801和KS-805雙柱串聯(lián)檢測(cè)的有效性;此外,對(duì)比單柱及雙柱條件下發(fā)酵產(chǎn)物的色譜圖發(fā)現(xiàn),雙柱串聯(lián)不僅能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)各個(gè)分子量片段右旋糖酐的檢測(cè),而且可以有效地分離、鑒定和定量檢測(cè)發(fā)酵液中的蔗糖、葡萄糖和果糖。(2)探究了單酶法耦合兩級(jí)膜條件下右旋糖酐蔗糖酶催化合成產(chǎn)物右旋糖酐的機(jī)理,并且研究了不同蔗糖底物濃度及右旋糖酐蔗糖酶添加量對(duì)產(chǎn)物右旋糖酐分子量、產(chǎn)量、得率及蔗糖轉(zhuǎn)化率的影響。通過(guò)跟蹤檢測(cè)不同蔗糖濃度和右旋糖酐蔗糖酶添加量條件下,一級(jí)膜和二級(jí)膜料液桶中右旋糖酐分子量的變化,間接的證實(shí)了右旋糖酐的聚合機(jī)理有可能是右旋糖酐分子鏈在右旋糖酐蔗糖酶活性位點(diǎn)上不斷聚合葡萄糖基,直至達(dá)到一定的分子量(Mw106 Da)才脫落,而不是一個(gè)從小到大,慢慢聚合,不斷脫落的過(guò)程。在兩級(jí)膜的干預(yù)下,右旋糖酐分子量同蔗糖底物濃度和右旋糖酐蔗糖酶添加量呈正相關(guān)關(guān)系;蔗糖轉(zhuǎn)化率反比于蔗糖底物濃度,正比于右旋糖酐蔗糖酶添加量;右旋糖酐產(chǎn)量正比于蔗糖底物濃度和右旋糖酐蔗糖酶添加量。(3)在單酶法耦合兩級(jí)膜的基礎(chǔ)上引入右旋糖酐酶構(gòu)建雙酶法耦合兩級(jí)膜反應(yīng)體系對(duì)右旋糖酐分子量進(jìn)行調(diào)控。在雙酶酶活比(右旋糖酐蔗糖酶:右旋糖酐酶)為10:1,底物濃度為0.8 M、右旋糖酐蔗糖酶添加量為0.2 U/mL時(shí),二級(jí)膜料液桶中目標(biāo)分子量片段右旋糖酐(104 DaMw105 Da)所占比例達(dá)到68.71%。兩級(jí)膜的作用使得二級(jí)膜料液桶中右旋糖酐分子量分布很集中,產(chǎn)物均一度(D值接近1)較高。另外,雙酶法耦合兩級(jí)膜制備右旋糖酐過(guò)程中0.6 U/mL反應(yīng)體系系列的產(chǎn)物右旋糖酐分子量變化遵循超聲降解右旋糖酐的經(jīng)典“鏈中點(diǎn)剪切模型”:ln(M0-Mlim/Mt-Mlim)=kMlimt。經(jīng)過(guò)擬合后,線性關(guān)系良好,此模型可較好的估計(jì)或預(yù)測(cè)任意反應(yīng)時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物右旋糖酐的分子量水平。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：O636.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 姜毅;雷光鴻;王元春;曹敏;韋艷君;;酶法耦合分級(jí)膜制備右旋糖酐的研究[J];食品科技;2015年02期

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1 甘微葦;右旋糖酐蔗糖酶與右旋糖酐酶協(xié)同催化制備低聚右旋糖酐與低聚糖的研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2014年

2 劉麗婭;溶析結(jié)晶輔助膜分離技術(shù)純化藥用右旋糖酐的研究[D];廣西大學(xué);2008年

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本文編號(hào)：2338556