【摘要】：單增李斯特菌是一種廣泛的食源性致病菌,它可以通過奶制品、肉類等引起細(xì)菌性食物中毒,是食品安全領(lǐng)域的重點關(guān)注對象。而傳統(tǒng)的單增李斯特菌的檢測方法雖然相對準(zhǔn)確,但檢測周期較長且步驟繁瑣,因此,開發(fā)一種靈敏、快速、簡單、低成本的檢測單增李斯特菌的方法已經(jīng)成為現(xiàn)今食品衛(wèi)生行業(yè)的重要環(huán)節(jié)。近年來,量子點作為一種新型的熒光探針,具有良好的光穩(wěn)定性,本論文以巰基乙酸為穩(wěn)定劑,一步法合成水溶性CdTe量子點,再在殼聚糖上修飾丙烯�；膫�(cè)鏈合成NAC功能單體,然后在EDC的作用下將其與CdTe量子點進(jìn)行連接形成NAC-QDs復(fù)合物,再將NAC-QDs作為功能單體,以單增李斯特菌為模板分子,TRIM和DVB為交聯(lián)劑,過氧化苯甲酰引發(fā)聚合反應(yīng),采用基于Pickering乳液與分子印跡技術(shù)相結(jié)合,制備了對單增李斯特菌特異性識別的熒光分子印跡聚合物。本實驗對聚合反應(yīng)的條件進(jìn)行優(yōu)化和分析,對分子印跡聚合物的吸附性能和選擇性識別的能力進(jìn)行測定。利用掃描電鏡、熒光分光光度計、傅立葉紅外光譜、倒置熒光顯微鏡對熒光分子印跡聚合物進(jìn)行表征,并對吸附性能實驗的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)果表明:在最優(yōu)的合成條件下,該聚合物通過印跡孔穴特異性識別單增李斯特菌,具有較好的選擇性,吸附2 h后基本達(dá)到吸附平衡,吸附容量約為1644.45 CFU/mg。本文建立了一種基于熒光分子印跡材料對單增李斯特菌的檢測方法,經(jīng)熒光可視和直接計數(shù),兩步判斷結(jié)果。隨著單增李斯特菌菌懸液濃度的增大,熒光分子印跡聚合物的猝滅效果更明顯,熒光可視檢測法的最低檢出限為10~3CFU/mL:直接計數(shù)法最低檢出量的菌濃約為75 CFU/mL。為了驗證實驗建立檢測方法的實用性,對人工污染的牛奶和豬肉中的單增李斯特菌進(jìn)行檢測分析,在牛奶和豬肉中依次加入不同濃度的單增李斯特菌液,經(jīng)檢測牛奶的熒光可視法的最低檢出限為1.6×103CFU/g,豬肉的熒光可視法的最低檢出限為6.5×10~2CFU/g;直接計數(shù)牛奶中最低檢出量的菌濃約為120CFU/g,豬肉中最低檢出量的菌濃約為76CFU/g。
[Abstract]:Listeria monocytogenes (Listeria monocytogenes) is a kind of foodborne pathogenic bacteria which can cause bacterial food poisoning through dairy products meat etc. It is the focus of attention in the field of food safety. Although the traditional method for detection of Listeria monocytogenes is relatively accurate, the detection period is long and the steps are tedious. Therefore, a sensitive, rapid and simple method is developed. Low-cost detection of Listeria monocytogenes has become an important part of the food hygiene industry. In recent years, as a new fluorescent probe, quantum dots have good photostability. In this paper, water-soluble CdTe quantum dots were synthesized by one-step method using mercaptoacetic acid as stabilizer. NAC functional monomer was synthesized by modifying the side chain of acrylyl group on chitosan, and then connected with CdTe quantum dot under the action of EDC to form NAC-QDs complex. NAC-QDs was used as functional monomer and Listeria monocytogenes as template molecule. Fluorescence molecularly imprinted polymers (FMIPs) specifically recognized by Listeria monocytogenes were prepared by using TRIM and DVB as crosslinkers and benzoyl peroxide initiated polymerization by combining Pickering emulsion with molecular imprinting technique. The conditions of polymerization were optimized and analyzed, and the adsorption properties and selective recognition ability of molecularly imprinted polymers were determined. Fluorescence molecularly imprinted polymers were characterized by scanning electron microscope, fluorescence spectrophotometer, Fourier transform infrared spectroscopy and inverted fluorescence microscope. The polymer can specifically identify Listeria monocytogenes by imprinting holes, and has good selectivity. After 2 h adsorption, the adsorption equilibrium is basically achieved, and the adsorption capacity is about 1644.45 CFU/mg.. In this paper, a method for the detection of Listeria monocytogenes based on fluorescent molecular imprinting material was established. The results were judged by fluorescence visible and direct counting. With the increase of the suspension concentration of Listeria monocytogenes, the quenching effect of fluorescent molecularly imprinted polymer was more obvious. The detection limit of fluorescence visual detection method was 10 ~ 3 CFU / mL, and the concentration of bacteria detected by direct counting method was about 75 CFU/mL.. In order to verify the practicability of the method established in the experiment, Listeria monocytogenes in artificially contaminated milk and pork were detected and analyzed. Different concentrations of Listeria monocytogenes were added to milk and pork in turn. The detection limit of fluorescence visual method was 1.6 脳 10 ~ 3 CFU / g, and that of pork was 6.5 脳 10 ~ (-2) CFU / g. The concentration of bacteria detected in milk directly was about 120 CFU / g, and that in pork was about 76 CFU / g.
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：TS207.4;O657.3

【參考文獻(xiàn)】

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6 何U，

本文編號：2309314