【摘要】：外源性激素主要有動(dòng)物激素與植物激素兩大類,常用來提高牲畜生長(zhǎng)速度、奶牛的產(chǎn)奶量,提高水果的品質(zhì)并延長(zhǎng)保鮮時(shí)間等,但是人工合成的激素化學(xué)性質(zhì)相對(duì)較穩(wěn)定,易在動(dòng)植物體內(nèi)及水環(huán)境中殘留,對(duì)人類健康存在潛在的威脅。選擇合適的生物分子,研究外源激素與生物分子的相互作用,根據(jù)相互作用構(gòu)建合適的傳感器,對(duì)外源激素進(jìn)行測(cè)定具有非常重要的意義。目前,重要的生物大分子主要包括蛋白質(zhì)、核酸、脂類和多糖,而酶作為一種蛋白質(zhì),在生物體內(nèi)具有特殊的催化作用,對(duì)維持生物體內(nèi)的生化反應(yīng)和新陳代謝等生命活動(dòng),具有重要的作用。各類藥物小分子進(jìn)入人體中,會(huì)對(duì)酶的結(jié)構(gòu)和活性造成損害。因此,選擇具有代表性的酶分子,研究激素與酶的相互作用以及對(duì)激素的殘留進(jìn)行測(cè)定顯得非常必要。本論文選擇雙烯雌酚及2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)作為研究對(duì)象,主要從分子水平上研究了雙烯雌酚與過氧化氫酶的作用機(jī)理,并基于不同的載體固定生物酶分子構(gòu)建酶抑制傳感器測(cè)定2,4-D的含量。本論文主要分為四個(gè)部分。第一部分介紹了幾種常用的激素以及生物大分子的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和應(yīng)用。概述了激素與生物大分子相互作用的主要研究方法,酶的固定化方法及固定載體的研究,測(cè)定激素殘留的檢測(cè)方法,并提出了本文的設(shè)計(jì)思路和創(chuàng)新點(diǎn)。第二部分主要利用同步熒光、三維熒光、時(shí)間分辨熒光等熒光光譜法、紫外可見吸收光譜法、圓二色譜法等方法,研究了雙烯雌酚與過氧化氫酶的相互作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雙烯雌酚對(duì)過氧化氫酶內(nèi)源熒光的猝滅是一種靜態(tài)猝滅機(jī)制。結(jié)合熒光光譜數(shù)據(jù)計(jì)算得到了結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、結(jié)合距離及熱力學(xué)參數(shù)等數(shù)據(jù)。雙烯雌酚的加入會(huì)改變過氧化氫酶中氨基酸殘基的微環(huán)境并影響蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)還探討了雙烯雌酚對(duì)過氧化氫酶催化活性的影響,結(jié)果表明雙烯雌酚對(duì)過氧化氫酶的抑制為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。第三部分通過吸附交聯(lián)法合成了氨基功能化的Fe3O4-殼聚糖(Fe3O4-NH2-CS)磁性納米復(fù)合材料,并用共價(jià)法將過氧化氫酶固定在材料表面,通過2,4-D對(duì)固定化過氧化氫酶的抑制作用構(gòu)建酶抑制傳感器,測(cè)定樣品中2,4-D的含量。當(dāng)2,4-D的濃度在5.0×10-8mol/L-1.05×10-6mol/L范圍內(nèi)時(shí),抑制率呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為4.0×10-8mol/L該方法具有操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、靈敏度高、重復(fù)使用率高、使用成本低等優(yōu)點(diǎn),能用于測(cè)定實(shí)際樣品中的2,4-D的殘留量。第四部分主要利用一種冰膠聚合物作為載體通過凝膠包埋法固定辣根過氧化物酶,辣根過氧化物酶可以催化H202氧化TMB生產(chǎn)藍(lán)色的氧化底物,基于2,4-D對(duì)固定化辣根過氧化物酶催化活性的抑制測(cè)定2,4-D。當(dāng)2,4-D的濃度在5.0×10-8mol/L-1.2×10-6mol/L范圍內(nèi),呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為3.0×10-8mol/L。該酶抑制傳感器可以成功地測(cè)定實(shí)際樣品中的2,4-D含量,對(duì)2,4-D的測(cè)定表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性,靈敏度和重復(fù)使用率,能用顯色的方法快速測(cè)定實(shí)際樣品中的2,4-D殘留。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O629.8;O657.3

【參考文獻(xiàn)】

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3 冷曬祥;錢國(guó)坻;華兆哲;堵國(guó)成;陳堅(jiān);;過氧化氫酶的棉針織物漂染工藝研究[J];印染;2006年19期

4 劉冰,梁嬋娟;生物過氧化氫酶研究進(jìn)展[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2005年05期

5 周詩毅,袁均林,賀紅武,馬玉涵,譚宏亮;包埋法固定SOD及固定化酶性質(zhì)的研究[J];華中師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年01期

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本文編號(hào)：2253781