本文選題：ω-6和ω-3多不飽和脂肪酸 + 柱前衍生�。� 參考：《華南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：ω-6與ω-3多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑,在食品行業(yè)中被廣泛應(yīng)用。研究結(jié)果表明,當(dāng)PUFAs總攝入量以及ω-6與ω-3PUFAs比例在適宜范圍內(nèi)有助于預(yù)防心血管疾病、腫瘤和提高嬰幼兒智力發(fā)育等,為了評判富含ω-6與ω-3 PUFAs產(chǎn)品的質(zhì)量,為消費(fèi)者合理選擇提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),加強(qiáng)檢測ω-6和ω-3 PUFAs的含量和其組成比例成為必要。目前,檢測脂肪酸的國標(biāo)方法和文獻(xiàn)方法中,氣相色譜法應(yīng)用較為廣泛,但不飽和脂肪酸(unsaturated fatty acids,UFA)特別是PUFAs存在在高溫下分析時(shí)其不飽和雙鍵易發(fā)生異構(gòu)化甚至碳鏈發(fā)生斷裂的問題,影響測定的準(zhǔn)確性,而近年來報(bào)道的高效液相色譜法(HPLC)可避免上述問題,但仍存在以下問題:(1)脂肪酸不經(jīng)過衍生直接被測定的方法,采用200~210 nm的檢測波長,測定時(shí)抗干擾性差,測定的結(jié)果準(zhǔn)確性低;(2)大部分脂肪酸柱前衍生測定的方法,前處理方法過程復(fù)雜且繁瑣,反應(yīng)條件需嚴(yán)格無水;(3)以2-硝基苯肼鹽酸鹽(2-NPH·HCl)作衍生劑的柱前衍生化條件溫和,前處理簡單,可在水相中進(jìn)行,但因沒有脂肪酸衍生產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)品,在衍生條件優(yōu)化研究中,僅通過脂肪酸衍生產(chǎn)物的峰面積或峰高來確定脂肪酸衍生反應(yīng)的最佳條件,這種方法并不能知道脂肪酸實(shí)際的衍生率,影響最終結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文針對上述檢測方法存在的缺陷,制備了正十四碳酸苯酰肼(myristic benzhydrazide,MBH)對照品;優(yōu)化了脂肪酸的HPLC柱前衍生條件,建立了測定脂肪酸的HPLC分析方法;優(yōu)化了樣品的皂化條件;對食用油(橄欖油、茶籽油等)、保健食品(魚油、魚肝油等)和奶粉(嬰幼兒奶粉等)中6種ω-6 PUFAs和ω-3 PUFAs(α-亞麻酸ALA、二十碳五烯酸EPA、二十二碳六烯酸DHA、γ-亞麻酸GLA、花生四烯酸AA、亞油酸LA)進(jìn)行了檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)制備了MBH對照品。選取正十四碳酸為代表,合成了MBH化合物,純化獲得的MBH對照品純度為99.81%。(2)優(yōu)化了同時(shí)檢測6種ω-6和ω-3 PUFAs的HPLC柱前衍生條件。通過單因素實(shí)驗(yàn),得到最優(yōu)的衍生化條件:溶解衍生劑的溶劑為80%乙醇,2-NPH·HCl濃度和添加量分別為0.04 mol/L和200μL,1-EDC·HCl濃度為0.45 mol/L,吡啶濃度為3%,1-EDC·HCl工作液添加量為200μL,60℃水浴加熱15 min,最適的pH值范圍為4.0~6.0。(3)建立了同時(shí)檢測6種ω-6和ω-3 PUFAs的HPLC方法,通過篩選流動(dòng)相組成、流動(dòng)相pH值和柱溫,確定最佳色譜條件為:色譜柱為Sunfire色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-水溶液(88:12),采用等度洗脫(88:12),柱溫35℃,流速為1.0 mL/min,檢測波長為400 nm,進(jìn)樣量10μL。(4)優(yōu)化了樣品中脂質(zhì)的皂化條件。通過單因素實(shí)驗(yàn),得到最優(yōu)的皂化條件:皂化試劑為KOH乙醇溶液(V(乙醇):V(水)=4:1),80℃水浴加熱40 min;樣品經(jīng)上述條件皂化后,不同加標(biāo)濃度下目標(biāo)物的回收率在93.57%~104.99%之間,日內(nèi)精密度小于1.84%,日間精密度小于2.05%。方法的檢出限為0.20~0.25μg/mL,定量限為0.5~0.6μg/mL。(5)本文采用所建立的方法對市售的食用油、保健食品和奶粉中6種ω-6和ω-3PUFAs進(jìn)行了檢測,發(fā)現(xiàn)天然植物油和動(dòng)物油中,只有深海魚油含有的6種ω-6和ω-3PUFAs種類多;測得的目標(biāo)物的含量與包裝上標(biāo)簽標(biāo)識的含量基本一致,且添加量在國家規(guī)定的范圍之內(nèi);天然植物油中,某品牌芥花油所含的ALA和LA含量最高,更適于消費(fèi)者購買;某品牌橄欖油、芥花油、大豆油、魚肝油中ω-6與ω-3 PUFAs比例在2.27~10.07之間,基本在推薦值范圍內(nèi);某品牌茶籽油、玉米油、花生油中ω-6與ω-3 PUFAs比例過高,遠(yuǎn)超出推薦值的最大值;ω-3與ω-6 PUFAs比例為13.06的某品牌深海魚油適用于我國飲食ω-6 PUFAs過剩的居民,可平衡二者在體內(nèi)的比例;某品牌嬰幼兒1段奶粉中AA/DHA為2.03:1,基本符合強(qiáng)化奶粉中的添加比例,LA/ALA為11:1,與GB 10765-2010嬰幼兒配方食品中提供的比例不相符。
[Abstract]:In order to evaluate the quality of 蠅 - 6 and 蠅 - 3 PUfas , it is necessary for the determination of the content of 蠅 - 6 and 蠅 - 3 pufas . The results were as follows : ( 1 ) The results were as follows : ( 1 ) The MBH control was prepared . The results were as follows : ( 1 ) The MBH control was synthesized . The purity of the MBH control was 99.81 % . The optimum conditions for derivatization were as follows : 1 - EDC 路 HCl concentration of 0 . 04 mol / L and 200 渭L , 1 - EDC 路 HCl concentration of 0 . 45 mol / L , concentration of 1 - EDC 路 HCl working fluid of 200 渭L , water bath heating at 60 鈩，

本文編號：2108777