發(fā)布時間：2018-06-15 06:54

  本文選題：高通量篩選 + 微孔過濾板�。� 參考：《化工學報》2017年06期

【摘要】：針對色譜分離過程優(yōu)化,建立了基于微孔過濾板的蛋白吸附高通量篩選方法,用于介質(zhì)初篩、吸附性能考察、吸附等溫線和吸附動力學測定、吸附和洗脫條件優(yōu)化等。首先優(yōu)化了96孔過濾板的操作參數(shù),以2種離子交換介質(zhì)和2種混合模式介質(zhì)為典型代表,采用微孔過濾板方法考察了不同介質(zhì)和液相條件下牛血清白蛋白的吸附,得到結(jié)合載量分布圖,確定了合適的蛋白吸附和解吸條件。進一步測定了4種介質(zhì)在特定吸附條件下的吸附等溫線和吸附動力學曲線,獲得吸附相關參數(shù)。最后,采用微孔過濾板進行了洗脫條件優(yōu)化,并與填充柱色譜分離進行比較,驗證了方法的可靠性。結(jié)果表明,基于微孔過濾板的蛋白吸附高通量篩選是切實可行的,可以快速篩選色譜介質(zhì)和液相,優(yōu)化蛋白分離條件,具有資源消耗小、實驗通量大、研發(fā)周期短、適用性廣、穩(wěn)定性高的特點,是蛋白色譜分離過程優(yōu)化的一種新方法。
[Abstract]:According to the optimization of chromatographic separation process, a high throughput screening method for protein adsorption based on microporous filter plate was established, which was used for medium screening, adsorption performance evaluation, adsorption isotherm and adsorption kinetics determination, and optimization of adsorption and elution conditions. Firstly, the operating parameters of 96 hole filter plate were optimized. The adsorption of bovine serum albumin (BSA) in different media and liquid phase was investigated by using two kinds of ion exchange media and two mixed mode media as typical representatives. The suitable conditions of protein adsorption and desorption were determined. The adsorption isotherms and adsorption kinetics curves of four kinds of media under specific adsorption conditions were further determined and the adsorption parameters were obtained. Finally, the elution conditions were optimized by using microporous filter plate and compared with packed column chromatography to verify the reliability of the method. The results show that the high throughput screening of protein adsorption based on microporous filter plate is feasible. It can quickly screen chromatographic medium and liquid phase, optimize the conditions of protein separation, have the advantages of low resource consumption, large experimental flux, short R & D cycle and wide applicability. Because of its high stability, it is a new method to optimize the separation process of protein chromatography.
【作者單位】： 浙江大學化學工程與生物工程學院生物質(zhì)化工教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金項目(21476198,21576233) 國際科技合作專項項目(2015DFG42070)~~
【分類號】：O652.6;TQ936.2

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本文編號：2021112