本文選題：高效液相色譜　切入點(diǎn)：分析方法　出處：《成都理工大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：紫杉醇是一種強(qiáng)效的抗腫瘤藥物,在臨床上應(yīng)用非常廣泛,但其極難溶于水,且毒性較大,限制了進(jìn)一步應(yīng)用。在目前臨床使用的紫杉醇注射劑中,作為溶劑的聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇的混合溶液致敏性很高,毒副作用大。將紫杉醇制成脂質(zhì)體能有效改善其水溶性、減小細(xì)胞毒性、降低溶劑的致敏性。但由于脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)復(fù)雜,制劑工藝隨品種差異具有多樣性,因此,建立一個(gè)穩(wěn)定性高,重復(fù)性好的質(zhì)量分析方法就成為了一個(gè)難題。為了建立一套適合紫杉醇脂質(zhì)體的質(zhì)量分析方法,本課題首先采用常規(guī)方法制備紫杉醇脂質(zhì)體,通過高效液相色譜法對其藥物含量和包封率等重要質(zhì)量分析指標(biāo)的測定方法進(jìn)行了探索,建立了一套基于高效液相色譜法的含量和包封率的測定方法,并考察了此方法對于紫杉醇脂質(zhì)體含量及包封率測定的可靠性和穩(wěn)定性。再采用建立的該套方法對經(jīng)mPEG-姜黃素修飾的紫杉醇脂質(zhì)體(mPEG-cur/pac/lip)進(jìn)行含量、包封率、體外釋放和體內(nèi)組織分布進(jìn)行測定,結(jié)果顯示,該方法測定的結(jié)果穩(wěn)定性和重復(fù)性好,可用于mPEG-cur/pac/lip的質(zhì)量分析。采用薄膜水化法制備紫杉醇脂質(zhì)體,水化溶劑為含有1%吐溫-80的葡萄糖注射液。對紫杉醇脂質(zhì)體的含量測定方法學(xué)進(jìn)行探索,結(jié)果表明:色譜條件:甲醇/水=78/22,流速:1.0 mL·min-1,進(jìn)樣量:10μL,檢測波長:228 nm,柱溫:35°C。紫杉醇濃度在1-160μg·mL-1及20-800 ng·m L-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,R2≥0.999。平均加樣回收率為101.1%,精密度和重現(xiàn)性良好,RSD值均小于2,定量限QL為29.86 ng·m L-1,檢測限MDL為9.86 ng·mL-1。經(jīng)篩選確定紫杉醇脂質(zhì)體包封率的測定方法為魚精蛋白法,采用的魚精蛋白濃度為10 mg·m L-1,魚精蛋白與脂質(zhì)體體積比為2.5:10時(shí),魚精蛋白測定的加樣回收率最好,為100.4%,采用該方法測得的紫杉醇脂質(zhì)體的包封率為97%以上。為驗(yàn)證該方法的適用性,采用薄膜水化法制備了具有長循環(huán),抗多藥耐藥性的mPEG-cur/pac/lip,處方為:紫杉醇、大豆磷脂酰膽堿、膽固醇、甲氧基聚乙二醇-姜黃素、甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺質(zhì)量比為2:24:12:2:3,凍干賦形劑選為甘露醇,加入量為8%。使用本研究中建立的質(zhì)量分析方法對所制得的脂質(zhì)體含量及包封率進(jìn)行評價(jià),結(jié)果顯示,該方法測定條件下,mPEG-cur/pac/lip中紫杉醇分離度良好,其他輔料的保留時(shí)間對含量測定無干擾,得到紫杉醇含量為969.66μg·m L-1,載藥量4.65%。采用魚精蛋白法測定凍干前后mPEG-cur/pac/lip的包封率,結(jié)果顯示,該方法可有效測定凍干前后mPEG-cur/pac/lip的包封率,且重復(fù)性好。凍干后脂質(zhì)體包封率略有降低,但仍可達(dá)90%以上。該方法用于mPEG-cur/pac/lip體外釋放實(shí)驗(yàn)中藥物釋放量的測定,結(jié)果顯示,該方法對mPEG-cur/pac/lip體外釋放的紫杉醇具有良好的分離度,溶劑及輔料對紫杉醇的保留時(shí)間無干擾。體外釋放結(jié)果顯示,mPEG-cur/pac/lip具有一定的緩釋作用。用激光粒度儀測得脂質(zhì)體粒徑約為840 nm,脂質(zhì)體分布較為均勻,Zeta電位絕對值大于30 mV,脂質(zhì)體穩(wěn)定性較好。透射電鏡觀察脂質(zhì)體形態(tài)為圓整度較好的球形,部分能夠觀察到雙分子層結(jié)構(gòu)。將mPEG-cur/pac/lip與普通紫杉醇注射液對健康昆明小鼠進(jìn)行靜脈注射,觀察小鼠的狀態(tài)可知,脂質(zhì)體毒性及致敏性明顯降低。本研究中建立的脂質(zhì)體含量測定分析方法可用于小鼠組織樣品的分析測定,結(jié)果顯示,在心、肝、脾、肺、腎等組織樣品的測定中,組織樣品的雜質(zhì)峰均能與紫杉醇的峰分離良好,對紫杉醇的出峰時(shí)間無干擾,相比于普通紫杉醇注射液,mPEG-cur/pac/lip對脾和肺有一定的靶向性。本文建立了一套基于高效液相色譜法的紫杉醇脂質(zhì)體質(zhì)量分析方法,并用于具有抗多藥耐藥性的新型脂質(zhì)體mPEG-cur/pac/lip的質(zhì)量分析。結(jié)果證明該方法可用于mPEG-cur/pac/lip的含量,包封率、釋放和組織分布的含量測定,方法重復(fù)性好,可靠性高;所制得的mPEG-cur/pac/lip包封率高,穩(wěn)定性好,并具有一定的緩釋特性和脾、肺靶向性。建立的脂質(zhì)體含量測定方法及制備的mPEG-cur/pac/lip為紫杉醇的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定了良好的基礎(chǔ)。
[Abstract]:A new method for the determination of taxol liposome by high performance liquid chromatography ( HPLC ) was established . The entrapment efficiency of mPEG - cur / pac / lip in vitro release of mPEG - cur / pac / lip was more than 30 mV . The results showed that the method can be used to determine the entrapment efficiency of mPEG - cur / pac / lip in vitro . The results show that the method can be used in the determination of mPEG - cur / pac / lip content , encapsulation efficiency , release and tissue distribution . The results show that the method can be used for the determination of mPEG - cur / pac / lip , good repeatability and high reliability . The method can be used for the determination of mPEG - cur / pac / lip , good stability , and has certain sustained - release characteristics and spleen and lung targeting . The method for measuring the content of liposome and the preparation of mPEG - cur / pac / lip have laid a good foundation for further development and utilization of paclitaxel .

【學(xué)位授予單位】：成都理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：O657.72;TQ460.72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1704059