本文選題：脂質體納米探針　切入點：信號放大　出處：《聊城大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：近年來,在生命分析化學領域中,對生物分子的檢測方法要求越來越高,構建對生物大分子簡單快速、靈敏精確、經濟實惠、便捷有效的檢測策略已成為生命分析科學領域中研究的重點和熱點。生物分子信號放大技術在各種工具酶和納米磁球等生物材料的基礎上發(fā)展起來,它是一種前沿的分析技術,被廣泛地應用于生物分子的檢測。血糖儀(PGM)是床邊檢測儀器(Point-of care testing POCT)的一個重大突破,它不僅能夠方便地為家庭商購獲得,而且檢測過程還脫離了實驗室的條件和儀器操作。由于它的便攜式“袖珍“尺寸、成本劃算、定量測定可靠、操作簡單和即時得出結果等優(yōu)點已經被廣泛應用。脂質體具有理想的生物相容性和巨大的內部空腔,可以包封大量的生物分子設計成納米探針。因此,我們設計了以工具酶和納米磁球等為材料的熒光信號放大策略,并構建出以多功能脂質體納米探針為基礎的PGM檢測策略,實現(xiàn)了生物大分子的靈敏、經濟、精確、便攜檢測。本論文分別利用PGM檢測和熒光檢測兩種檢測手段,主要以Dam甲基轉移酶、磷脂酶D為研究對象,構建了多種新的信號放大檢測技術平臺,實現(xiàn)了其定量分析。主要內容包括:1、基于目標物控制脂質體“開-關”的級聯(lián)放大策略構建靈敏精確檢測乳腺癌細胞中磷脂酶D的新方法本章主要是基于目標物控制脂質體(TCGL)“開-關”的級聯(lián)放大策略,用PGM對磷脂酶D進行定量檢測。首先,我們將葡糖淀粉酶包裹于脂質體之中,無需對葡糖淀粉酶進行標記,省去了標記的復雜過程,保持了酶的原有生物活性。其次,檢測過程中使用便攜式定量設備血糖儀,繞開了對復雜儀器的需求以及相應的復雜操作,使我們的方法可以簡單、靈活地應用于原位檢測。該方法對磷脂酶D的檢測限達到0.005 U L~(-1)。此外,我們進一步在乳腺癌細胞中對磷脂酶D實行活性檢測并且做了抑制劑藥物篩選實驗,都取得了很好的效果。2、基于磁球/脂質體雜交探針構建血糖儀靈敏便攜檢測DNA甲基轉移酶的新方法本章以磁球/脂質體雜交探針為基礎,構建了一種以PGM為檢測工具,簡單便攜、靈敏度高、特異性強的DNA甲基轉移酶活性檢測以及抑制劑篩選的新方法。首先,我們將p1DNA功能化的磁球與p2DNA功能化的包裹葡糖淀粉酶的脂質體(GEL)雜交制備磁球-脂質體雜交探針。然后,在DNA甲基轉移酶的存在下,雜交探針被甲基化,進一步被對甲基化位點敏感的限制性內切酶Dpn I切割,通過磁分離,脂質體從磁球上分離下來。最后,用1%的Triton X-100溶液對分離下來的脂質體進行裂解,釋放出葡糖淀粉酶,葡糖淀粉酶將信號底物淀粉催化水解,產生大量的葡萄糖,隨之用血糖儀對葡萄糖進行定量檢測,檢測限達到2.0×10~(-4) U m L~(-1)。此外,我們進一步在人血清中進行了Dam甲基轉移酶的活性檢測實驗,取得了較好的結果。3、基于磁性納米顆粒協(xié)同核酸外切酶III輔助的循環(huán)放大構建靈敏精確檢測DNA甲基轉移酶的新方法本章構建了一種Dam甲基轉移酶活性檢測的熒光磁性生物傳感器,這種傳感器基于磁性納米粒子協(xié)同核酸外切酶III輔助的循環(huán)指數(shù)擴增與超分子結構鋅原卟啉/G-四鏈體相結合的協(xié)同信號放大策略。在該傳感器中,少量的甲基轉移酶可誘導出大量穩(wěn)定的DNA觸發(fā)器,導致了目標物的顯著擴增。而且,用磁性納米粒子作為傳感器的載體可以在實際樣品中減少干擾,這增強了傳感體系的抗干擾性。基于這種獨特的擴增策略,測出的檢測限為2.0×10~(-4) U m L~(-1)。此外,該傳感器不僅可用于評估大腸桿菌細胞不同生長階段中甲基轉移酶的活性,還可以進行甲基轉移酶抑制劑的篩選。
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【學位授予單位】：聊城大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：O657.3

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本文編號：1582201