本文關(guān)鍵詞：非標(biāo)記核酸適配體傳感器檢測(cè)動(dòng)物源性食品中四環(huán)素和多巴胺殘留　出處：《吉林大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目前,動(dòng)物物源性食品中的獸藥殘留已經(jīng)成為人類健康與食品安全的一大威脅。傳統(tǒng)的獸藥殘留檢測(cè)方法通常比較昂貴、耗時(shí)、步驟繁瑣、選擇性差,難以滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需求。核酸適配體能夠特異性地結(jié)合目標(biāo)物,并伴隨著自身構(gòu)象的變化,具有親和力高、特異性強(qiáng)、成本低等優(yōu)點(diǎn),已成為一種新型理想的生物傳感器識(shí)別元件,被廣泛地應(yīng)用于食品分析領(lǐng)域。根據(jù)是否對(duì)核酸適配體進(jìn)行標(biāo)記或修飾,核酸適配體傳感器可以分為標(biāo)記型和非標(biāo)記型。對(duì)核酸適配體的標(biāo)記過程通常耗時(shí)、費(fèi)力、昂貴,且會(huì)影響其與目標(biāo)物結(jié)合的親和力與特異性。因此,本文以染料作為信號(hào)探針,基于目標(biāo)物和核酸適配體間的特異性結(jié)合,建立了兩種非標(biāo)記型核酸適配體傳感器,具有快速、簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本低、靈敏度高且選擇性好等優(yōu)點(diǎn),可以被推廣應(yīng)用于食品中其他有害物小分子的檢測(cè)中,在農(nóng)業(yè)和環(huán)境領(lǐng)域?qū)⒂懈鼜V大的應(yīng)用前景。研究?jī)?nèi)容主要包括:1.以核酸適配體作為識(shí)別元件、以插入型染料噻唑橙(Thiazole Orange,TO)作為信號(hào)元件構(gòu)建了一種非標(biāo)記核酸適配體傳感器檢測(cè)四環(huán)素(Tetracycline,TET)。TET的核酸適配體為富含G堿基的單鏈DNA,本身存在著G-四聯(lián)體構(gòu)型。TO在游離狀態(tài)下幾乎沒有熒光,但可以插入DNA尤其是G-四聯(lián)體構(gòu)型的DNA中,產(chǎn)生極大的熒光增強(qiáng)效應(yīng)。當(dāng)TET不存在時(shí),TO會(huì)嵌入到核酸適配體中,并產(chǎn)生熒光信號(hào)。當(dāng)TET存在時(shí),TET核酸適配體會(huì)與TET特異性地結(jié)合并發(fā)生構(gòu)型變化,核酸適配體的G-四聯(lián)體構(gòu)型遭到破壞,TO被釋放為游離狀態(tài)從而導(dǎo)致體系熒光強(qiáng)度的降低。根據(jù)這種熒光強(qiáng)度的變化可以實(shí)現(xiàn)對(duì)TET的特異性檢測(cè)。在最優(yōu)反應(yīng)條件下,該核酸適配體傳感器對(duì)TET進(jìn)行檢測(cè)的線性范圍為0.05-1000μg/m L,檢出限為0.022μg/m L,并應(yīng)用于牛奶樣品中的TET檢測(cè),回收率在89.0%-107.9%范圍內(nèi),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(Relative Standard Deviation,RSD)為0.6%-1.4%。因此,這種非標(biāo)記核酸適配體傳感器簡(jiǎn)單快速、成本低、靈敏性和選擇性好,為四環(huán)素的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)單、快速的新方法。2.基于核酸適配體與目標(biāo)物的特異性結(jié)合以及羅丹明B(Rhodamine B,RB)和金納米粒子(Au Nanoparticles,Au NPs)間的熒光共振能量轉(zhuǎn)移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)建立了一種檢測(cè)多巴胺的非標(biāo)記型核酸適配體傳感器。單鏈核酸適配體可以吸附在Au NPs表面,增強(qiáng)Au NPs的穩(wěn)定性,有效抵抗鹽離子誘導(dǎo)的聚集,分散的Au NPs通過FRET猝滅RB的熒光。當(dāng)目標(biāo)物多巴胺存在時(shí),多巴胺核酸適配體與多巴胺的特異性結(jié)合可引起其構(gòu)象發(fā)生變化使其無法保護(hù)Au NPs,鹽效應(yīng)使失去保護(hù)的Au NPs發(fā)生聚集,從而降低FRET效率,此時(shí),RB的熒光恢復(fù)。在最適反應(yīng)條件下,該熒光傳感器對(duì)多巴胺進(jìn)行檢測(cè)的線性范圍為26-2.90×103 n M,檢出限為2 n M,并且已成功應(yīng)用于豬飼料和雞肝樣品中多巴胺的檢測(cè),回收率在91.4%-103.5%范圍內(nèi),RSD為0.9%-2.3%。該方法具有操作簡(jiǎn)便,靈敏度低、選擇性好等優(yōu)點(diǎn),可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中多巴胺殘留的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。不僅如此,這種非標(biāo)記核酸適配體傳感器對(duì)食品中的其他獸藥殘留、乃至其他有害物小分子均具有很好的應(yīng)用前景。
[Abstract]:The present invention has the advantages of high affinity , strong specificity , low cost and the like , and has the advantages of high affinity , strong specificity , low cost and the like , and has the advantages of high affinity , high specificity , low cost and the like , and has the advantages of high affinity , high specificity , low cost and the like , and can be widely applied to the detection of other harmful substances in food . In the presence of TET , the specific binding of the aptamer sensor to the target substance and the fluorescence resonance energy transfer between rhodamine B ( RB ) and gold nanoparticle ( Au ) can cause the fluorescence intensity of the system to be reduced . The detection limit is 2 n M and has been successfully applied to the detection of dopamine in pig feed and chicken liver samples . The recovery rate is in the range of 91.4 % - 103.5 % with RSD of 0.9 % - 2.3 % . The method has the advantages of simple operation , low sensitivity , good selectivity , etc . The method has the advantages of simple operation , low sensitivity , good selectivity and the like .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.3;TS207.5

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本文編號(hào)：1370613