本文關(guān)鍵詞：基于氨基苯并咪唑配基的疏水性電荷誘導(dǎo)層析介質(zhì)制備和蛋白吸附研究　出處：《浙江大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：疏水性電荷誘導(dǎo)層析(hydrophobic charge-induction chromatography, HCIC)是一種新型抗體分離方法,其功能配基兼有疏水和靜電相互作用,中性條件下利用疏水作用吸附目標(biāo)蛋白,調(diào)節(jié)pH改變配基的荷電特性,依靠靜電排斥作用協(xié)助蛋白洗脫。目前,HCIC介質(zhì)的蛋白吸附性能有待提高。本論文以抗體分離為目標(biāo),以5-氨基苯并咪唑(5-aminobenzimidazole,ABI)為功能配基,比較三種配基偶聯(lián)方式,制備不同配基密度的系列介質(zhì),考察配基密度和偶聯(lián)方式對蛋白吸附的影響,以指導(dǎo)新型介質(zhì)設(shè)計。主要結(jié)果如下：首先,以瓊脂糖凝膠為基質(zhì),優(yōu)化ABI配基偶聯(lián),制備了不同配基密度的ABI-B-6FF介質(zhì)。以人免疫球蛋白(hIgG)和牛血清白蛋白(BSA)為模型蛋白,考察了靜態(tài)吸附、吸附動力學(xué)和蛋白穿透行為,發(fā)現(xiàn)隨著配基密度的增大,蛋白飽和吸附容量和有效擴散系數(shù)逐步增大,并趨于飽和；高配基密度介質(zhì)具有更高的動態(tài)載量,且隨流速影響小；hIgG吸附量高于BSA,隨著配基密度增大,hIgG的吸附選擇性有所提高；引入孔表面配基密度,發(fā)現(xiàn)與飽和吸附容量、有效擴散系數(shù)和動態(tài)載量呈線性相關(guān)。其次,以葡聚糖接枝的瓊脂糖凝膠為基質(zhì),制備了不同配基密度的ABI-B-XL介質(zhì)。以hIgG為模型蛋白,考察了pH、添加鹽和配基密度對蛋白吸附的影響。發(fā)現(xiàn)pH影響顯著,7.0～8.5之間吸附容量較高；添加鹽對蛋白吸附影響不大,體現(xiàn)出較好的耐鹽吸附特性；隨配基密度增大,蛋白吸附容量、有效擴散系數(shù)和動態(tài)載量均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢,最優(yōu)配基密度為220 μmol/g,100cm/h線性流速下hIgG的動態(tài)載量達66.70 mg/g。結(jié)果表明,葡聚糖接枝ABI-B-XL介質(zhì)比未接枝的ABI-B-6FF介質(zhì),抗體吸附性能顯著提高。最后,以瓊脂糖凝膠為基質(zhì),以甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)為接枝單體,采用原位聚合方法,通過控制GMA和配基添加量,制備了系列G-ABI-4FF介質(zhì),配基密度顯著高于葡聚糖接枝介質(zhì)�？疾炝伺浠芏葘橘|(zhì)吸附hIgG的影響,發(fā)現(xiàn)隨配基密度增大,蛋白吸附容量、有效擴散系數(shù)和動態(tài)載量均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢,最優(yōu)配基密度為330 μmol/g,100 cm/h線性流速下hIgG的動態(tài)載量高達82.10 mg/g,且隨流速變化小。相比葡聚糖接枝介質(zhì),GMA接枝介質(zhì)的抗體吸附性能進一步得到改善。本文圍繞新型HCIC介質(zhì)制備,系統(tǒng)考察了配基偶聯(lián)方式和配基密度對抗體吸附的影響,發(fā)現(xiàn)孔內(nèi)接枝可以有效提高吸附容量、促進孔內(nèi)傳質(zhì)、改善動態(tài)載量,特別是原位聚合的GMA接枝介質(zhì),配基密度顯著提高,配基分布更加均勻,有效改善了HCIC介質(zhì)的動態(tài)結(jié)合性能,顯示出良好的抗體分離應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O647.3;TQ464

【參考文獻】

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1 施偉;林東強;姚善涇;;疏水性電荷誘導(dǎo)擴張床吸附分離免疫球蛋白IgY[J];化工學(xué)報;2014年01期

2 陳振明;林東強;姚善涇;;新型混合模式層析介質(zhì)制備及用于牛初乳免疫球蛋白分離[J];化工學(xué)報;2012年08期

3 莊甜甜;夏海鋒;林東強;姚善涇;;混合模式吸附層析從豬血漿中分離免疫球蛋白[J];化工學(xué)報;2010年02期

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本文編號：1324145