發(fā)布時(shí)間：2017-12-22 03:17

  本文關(guān)鍵詞：冰膠聚合物在蛋白質(zhì)分子印跡中的應(yīng)用　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：冰膠(Cryogel)是一種通過(guò)冷凍聚合得到的孔徑在數(shù)微米至數(shù)百微米之間的高分子材料,它以特有的大孔結(jié)構(gòu)、良好的機(jī)械性能和穩(wěn)定性越來(lái)越受到人們的關(guān)注,并在吸附、固定化以及催化載體等方面有著廣泛的應(yīng)用。蛋白質(zhì)分子印跡聚合物可以用作抗體、酶或其他天然生物結(jié)構(gòu)的替代物,在醫(yī)學(xué)與生物工程等領(lǐng)域顯示出廣闊的應(yīng)用前景。本文將冰膠技術(shù)與分子印跡技術(shù)相結(jié)合制備了以聚丙烯酰胺為基質(zhì)的蛋白質(zhì)印跡冰膠聚合物,研究了其對(duì)蛋白質(zhì)的吸附和識(shí)別性能,并對(duì)其識(shí)別機(jī)理進(jìn)行了分析。本文的主要研究?jī)?nèi)容如下：1、聚丙烯酰胺冰膠聚合物的合成和表征以丙烯酰胺為單體,甲叉雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,丙烯酸、烯丙基胺為功能單體,合成了改性聚丙烯酰胺冰膠�？疾炝藛误w與交聯(lián)劑配比、溶劑類(lèi)型、聚合溫度及聚合時(shí)間等合成條件對(duì)冰膠性能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在最佳實(shí)驗(yàn)條件下：?jiǎn)误w與交聯(lián)劑質(zhì)量比為2：1,溶劑為10mM磷酸鹽緩沖液(pH=7.4),聚合溫度為-200C,聚合時(shí)間為24h,所制備的冰膠具有較好的機(jī)械強(qiáng)度和滲透性。通過(guò)紅外光譜、掃描電鏡、電導(dǎo)滴定、熱重分析對(duì)冰膠進(jìn)行了一系列的表征。2、兩性印跡冰膠聚合物的合成及其性能研究以溶菌酶(LYS)、胃蛋白酶(PEP)、卵清蛋白(OVA)、牛血紅蛋白(BHB)和γ-球蛋白(γ-GL)為模板分子分別合成了五種兩性印跡冰膠,并通過(guò)原位聚合法得到一系列的兩性印跡冰膠整體柱�？疾旌捅容^了兩性聚丙烯酰胺冰膠對(duì)這些分子量和等電點(diǎn)(pI)覆蓋范圍廣泛的蛋白質(zhì)的印跡能力。毛細(xì)管電泳實(shí)驗(yàn)表明,不管蛋白質(zhì)的分子量和等電點(diǎn)是多少,印跡柱比非印跡柱都具有更高的保留時(shí)間。溶菌酶印跡冰膠的印跡因子(IF)最高為4.8,胃蛋白酶印跡冰膠的IF最低為2.6,其他蛋白質(zhì)印跡冰膠的IFs在兩者之間。結(jié)果表明,兩性冰膠是有效的蛋白質(zhì)印跡材料,在蛋白質(zhì)分離分析方面具有潛在的應(yīng)用。3、帶電基團(tuán)對(duì)蛋白質(zhì)印跡作用的強(qiáng)化以牛血清白蛋白(BSA)為模板分子,加入丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、丙烯酸和二烯丙基胺合成得到了多種改性分子印跡聚合物,通過(guò)吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)得各聚合物的印跡因子(IF)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,未修飾冰膠的印跡因子為1.38。無(wú)論酸性基團(tuán)還是堿性基團(tuán),將帶電基團(tuán)引入到聚合物中會(huì)明顯增大印跡因子,堿性冰膠中最大的IF約為2。同時(shí)使用丙烯酸和二烯丙基胺會(huì)進(jìn)一步增強(qiáng)親和力,兩性聚合物中最大的IF為3.7。無(wú)論是單獨(dú)使用還是同時(shí)使用,過(guò)量的酸性或堿性單體都會(huì)導(dǎo)致IF的降低,這可能是由于模板分子與過(guò)剩的帶電基團(tuán)之間發(fā)生庫(kù)倫排斥作用。以MIP-BSA為填料裝入20mm×4.6mm I.D不銹鋼管柱中,分別用MIP-BSA柱和NIP柱分離BSA、BHB及其混合溶液。MIP柱表現(xiàn)出對(duì)模板蛋白具有特異性識(shí)別能力,這使兩性冰膠在復(fù)雜樣品的前處理領(lǐng)域中具有良好的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：O631.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1318219