本文關(guān)鍵詞：基于生物功能化納米材料信號(hào)放大檢測(cè)凝血酶和汞離子的方法研究

  更多相關(guān)文章： 納米金 磁性微粒 時(shí)間分辨熒光 凝血酶 Hg~(2+)

【摘要】：近年來,在環(huán)境保護(hù)、臨床診斷和食品安全等很多領(lǐng)域中,對(duì)生物分子及重金屬離子的檢測(cè)要求越來越高。靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)策略的構(gòu)建已成為環(huán)境分析及生命分析科學(xué)研究領(lǐng)域中的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。納米粒子信號(hào)放大技術(shù)是利用納米顆粒較好的生物相容性以及高表面載體作用而發(fā)展起來的一種分析技術(shù),應(yīng)用該技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)生物小分子及重金屬離子快速、靈敏的檢測(cè)。本論文主要利用納米金、磁性納米顆粒作為固相載體,以核酸適配體作為分子識(shí)別手段,以辣根過氧化酶(HRP)和稀土銪離子螯合物作為信號(hào)基團(tuán),以凝血酶和汞離子作為研究對(duì)象,構(gòu)建了幾種基于生物功能化納米顆粒的信號(hào)放大平臺(tái),實(shí)現(xiàn)了對(duì)凝血酶和汞離子的高靈敏測(cè)定。論文分為以下三個(gè)部分:一、基于雙標(biāo)記納米金信號(hào)放大的時(shí)間分辨熒光分析法檢測(cè)凝血酶本實(shí)驗(yàn)首先制備了銪離子標(biāo)記的牛血清蛋白(BSA),然后將銪離子標(biāo)記的BSA和凝血酶的一條核酸適配體分別修飾到納米金表面,形成了集生物分子識(shí)別功能及信號(hào)放大功能的檢測(cè)平臺(tái)。然后將另一條凝血酶的核酸適配體結(jié)合到磁性納米顆粒表面。在凝血酶存在時(shí)兩條核酸適配體特異性識(shí)別凝血酶分子形成適配體-凝血酶-適配體夾心結(jié)構(gòu)。據(jù)此建立了利用高靈敏的時(shí)間分辨熒光測(cè)定凝血酶的方法。在適宜檢測(cè)條件下,該檢測(cè)方法的線性范圍為1-100 p M,檢出限達(dá)0.78 p M。并將該方法應(yīng)用到了實(shí)際樣品的測(cè)定。二、基于酶催化和納米金信號(hào)放大技術(shù)檢測(cè)凝血酶本實(shí)驗(yàn)將辣根過氧化酶與巰基修飾的凝血酶的核酸適配體分別通過靜電吸附和共價(jià)結(jié)合的方式修飾到納米金表面,形成基于納米金的兼具生物分子識(shí)別及信號(hào)放大的檢測(cè)平臺(tái)。在凝血酶存在時(shí),納米金上的一條核酸適配體與標(biāo)記在磁性納米顆粒上的凝血酶的另一條核酸適配體形成夾心結(jié)構(gòu)。利用辣根過氧化物酶催化TMB顯色的作用,檢測(cè)體系紫外-可見光強(qiáng)度,建立了一種高靈敏度測(cè)定凝血酶的光度分析法。根據(jù)吸收光的強(qiáng)弱間接獲得凝血酶的含量。本實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了一系列的探究,在適宜的檢測(cè)條件下,該方法的線性范圍為0.1-10 n M,檢出限可達(dá)0.07 n M。并將該方法應(yīng)用到了實(shí)際樣品的測(cè)定。三、基于生物功能化的納米金顆粒及鏈霉親和素雙重放大系統(tǒng)檢測(cè)汞離子本實(shí)驗(yàn)首先合成了銪離子螯合物標(biāo)記的鏈霉親和素(Eu3+-SA),并將該標(biāo)記物和巰基修飾的能特異性識(shí)別汞離子的寡聚核苷酸序列分別以靜電吸附和共價(jià)結(jié)合的方式修飾到納米金表面,形成基于納米金及Eu3+-SA的雙重信號(hào)放大信號(hào)平臺(tái)。在汞離子存在時(shí),納米金上的核苷酸序列與標(biāo)記在磁性納米顆粒上的另一互補(bǔ)序列雜交。在適宜檢測(cè)條件下該方法的線性范圍為1-1000 p M。檢出限達(dá)0.65 p M。利用該方法對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果令人滿意。
【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O657.3

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本文編號(hào)：1194612