本文關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳法評價細(xì)胞和小分子的親和相互作用

  更多相關(guān)文章： 親和相互作用 ACE 血小板 巨噬細(xì)胞 小分子化合物

【摘要】：毛細(xì)管電泳(CE)在評價物質(zhì)間的親和相互作用方面已有廣泛的應(yīng)用。主要電泳模式包括親和毛細(xì)管電泳法(ACE)、部分填充親和毛細(xì)管電泳法(PFACE)及前沿分析毛細(xì)管電泳法(FACE)等,研究對象主要包括核酸、蛋白質(zhì)及多糖等生物大分子與藥物小分子的相互作用。細(xì)胞作為基本生命單元,具有特殊的結(jié)構(gòu)及功能,在藥物吸收、分布及代謝方面發(fā)揮著重要作用。因此,研究細(xì)胞與小分子的親和相互作用具有重要意義。本文優(yōu)化建立幾種CE方法用于研究細(xì)胞與小分子的相互作用,包括中藥延胡索提取物的在線抗血小板聚集活性評價,具有抗血小板活性的酚酸類小分子化合物與血小板的相互作用,以及具有抗炎活性的苷類小分子化合物與巨噬細(xì)胞的相互作用。本論文主要包含五個部分(章節(jié)):第一部分為緒論部分,綜述了研究親和作用的意義、對象及方法,其中親和毛細(xì)管電泳廣泛用于物質(zhì)間結(jié)合常數(shù)的測定,并已發(fā)展有多種親和電泳模式用于評價不同體系。對血小板及巨噬細(xì)胞的生理、病理作用亦進行了簡要的概述。第二部分建立了一種在線測定血小板聚集率的CE新方法并用于評價藥物的抗血小板聚集活性。在闡明CE測定血小板聚集原理的基礎(chǔ)上,推導(dǎo)出CE測定藥物抗血小板聚集活性的計算公式。分別用CE及比濁法測定了中藥延胡索提取物的抗血小板聚集活性,比較兩種方法在樣品消耗、測定結(jié)果及測定原理方面的區(qū)別。第三部建立了血小板功能化的OT-ACEC方法用于評價血小板與小分子化合物的親和相互作用,成功評價丹酚酸B等小分子化合物與血小板的親和相互作用。同時用比濁法測定了這些小分子化合物體外抗ADP、AA及THR誘導(dǎo)的血小板聚集活性,分析小分子化合物的抗血小板聚集活性與小分子-血小板親和相互作用之間的關(guān)系。第四部分采用ACE、PFACE及FACE三種電泳模式評價了巨噬細(xì)胞與柚皮苷等小分子化合物的親和相互作用。其中,PFACE模式定性評價了巨噬細(xì)胞和小分子化合物的親和相互作用,FACE利用細(xì)胞的嗜線性測定了巨噬細(xì)胞和小分子的結(jié)合常數(shù)。此外,將巨噬細(xì)胞作為假固定相用于檸檬提取物中潛在活性成分的分析中。第五部分為實驗總結(jié)和展望。由本文的測定結(jié)果可知,CE可用于測定血小板在線聚集率、評價藥物的抗血小板聚集活性,評價血小板-小分子及巨噬細(xì)胞-小分子的親和相互作用。總之,基于CE作為分離、分析手段所具有的優(yōu)勢,CE將是一種具有潛力的方法用于在線評價細(xì)胞與藥物的相互作用,包括結(jié)合常數(shù)測定,細(xì)胞電泳分析及細(xì)胞釋放物質(zhì)分析檢測等。
【關(guān)鍵詞】：親和相互作用 ACE 血小板 巨噬細(xì)胞 小分子化合物
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O658.9;R285
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• 英文摘要4-8
• 縮略詞表8-9
• 1 緒論9-25
• 1.1 親和作用簡介9-11
• 1.1.1 親和作用研究對象9-10
• 1.1.2 親和作用定量方法10-11
• 1.2 親和作用研究方法11-14
• 1.2.1 基于混合物物化特性分析的親和作用研究方法11
• 1.2.2 基于物質(zhì)分離的親和作用研究方法11
• 1.2.3 毛細(xì)管電泳用于親和作用研究11-14
• 1.3 血小板簡介及中藥抗血小板聚集研究進展14-17
• 1.4 巨噬細(xì)胞簡介17-20
• 1.5 課題研究目的、意義、及內(nèi)容20-25
• 1.5.1 課題的研究目的與意義20
• 1.5.2 課題的研究內(nèi)容20-25
• 2 CE作為一種新方法用于評價藥物抗血小板聚集活性25-35
• 2.1 引言25-26
• 2.2 儀器及試劑26-27
• 2.3 實驗方法27-28
• 2.3.1 血小板分散液制備27
• 2.3.2 比濁法測定延胡索抗血小板聚集27
• 2.3.3 毛細(xì)管電泳分析血小板在線聚集27-28
• 2.3.4 毛細(xì)管電泳法測定延胡索提取物對THR誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用28
• 2.3.5 延胡索提取物對THR誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制作用的計算28
• 2.4 實驗結(jié)果及討論28-33
• 2.4.1 血小板的電泳特征及血小板與THR的在線作用28-30
• 2.4.2 延胡索提取物對THR誘導(dǎo)血小板聚集的抑制作用30-31
• 2.4.3 比濁法及毛細(xì)管電泳法測定延胡索提取物抗THR誘導(dǎo)血小板聚集活性比較31-33
• 2.5 小結(jié)33-35
• 3 開管親和毛細(xì)管電色譜法評價血小板和小分子的親和相互作用35-47
• 3.1 引言35
• 3.2 儀器及試劑35-36
• 3.3 實驗方法36-39
• 3.3.1 血小板和小分子親和作用評價36-38
• 3.3.2 抗血小板聚集活性測定38
• 3.3.3 親和作用與抗血小板聚集活性關(guān)系分析38-39
• 3.4 實驗結(jié)果及討論39-45
• 3.4.1 毛細(xì)管涂層長度的測定與涂層表征39-40
• 3.4.2 小分子與血小板親和作用評價40-42
• 3.4.3 小分子體外抗血小板聚集活性評價42-45
• 3.5 小結(jié)45-47
• 4 三種電泳模式評價巨噬細(xì)胞和小分子的親和相互作用47-61
• 4.1 引言47
• 4.2 儀器及試劑47-48
• 4.3 實驗方法48-50
• 4.3.1 巨噬細(xì)胞培養(yǎng)48
• 4.3.2 ACE評價小分子和巨噬細(xì)胞的親和相互作用48
• 4.3.3 PFACE評價小分子和巨噬細(xì)胞的親和相互作用48-49
• 4.3.4 FACE測定小分子和巨噬細(xì)胞的結(jié)合常數(shù)49-50
• 4.3.5 巨噬細(xì)胞用于分析復(fù)雜體系50
• 4.4 實驗結(jié)果及討論50-58
• 4.4.1 ACE評價巨噬細(xì)胞和小分子的親和相互作用50-51
• 4.4.2 PFACE評價巨噬細(xì)胞和小分子的親和相互作用51-53
• 4.4.3 FA測定巨噬細(xì)胞和柚皮苷的結(jié)合常數(shù)53-56
• 4.4.4 巨噬細(xì)胞用于分析復(fù)雜體系56-58
• 4.5 小結(jié)58-61
• 5 總結(jié)與展望61-65
• 5.1 實驗總結(jié)61-63
• 5.2 存在問題及展望63-65
• 致謝65-67
• 參考文獻67-71
• 附錄71
• A. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的論文71

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本文編號：1062222