本文關(guān)鍵詞：基于表面分子印跡對彈性蛋白酶的分離與檢測

  更多相關(guān)文章： 彈性蛋白酶 表面分子印跡 膜分離 新型單體 熒光傳感器

【摘要】：蛋白質(zhì)存在于生物體中,并參與重要的生理活動(dòng),如構(gòu)成和修補(bǔ)組織,增強(qiáng)機(jī)體抵抗力,調(diào)節(jié)滲透壓,構(gòu)成酶和激素的成分,提供能量等。對蛋白質(zhì)相應(yīng)的研究和應(yīng)用,帶來了對高純度蛋白質(zhì)的需要,使得蛋白質(zhì)的分離和檢測顯得至關(guān)重要。然而蛋白質(zhì)源自于生物體必然也帶有生物體賦予它的特性:高活性但易變性。也導(dǎo)致蛋白質(zhì)的分離步驟復(fù)雜,成本高。因此,可以以溫和且高效的狀態(tài)分離蛋白質(zhì)的技術(shù)具有較重要的意義。本論文對彈性蛋白酶的高效分離與檢測進(jìn)行了研究,為彈性蛋白酶的工業(yè)化生產(chǎn)給予一定的參考。具體研究類容如下:1、采用預(yù)聚液涂覆聚偏氟乙烯(PVDF)膜的方式制備表面分子印跡聚偏氟乙烯膜。對聚合條件中各組分的量進(jìn)行優(yōu)化,通過自制膜組件對其萃取性能進(jìn)行了研究。分子印跡層改變了聚偏氟乙烯膜的表面基團(tuán)種類并且?guī)肓藢椥缘鞍酌傅淖R(shí)別位點(diǎn),增強(qiáng)了膜絲的對彈性蛋白酶的萃取能力,印跡膜絲對彈性蛋白酶的萃取能力達(dá)到普通膜絲的1.29倍以上。同時(shí)也改善了膜絲的選擇性。SEM和接觸角表征結(jié)果表明聚偏氟乙烯膜表層形成了印跡層。重復(fù)使用實(shí)驗(yàn)表明印跡膜絲有非常好的重復(fù)使用能力。2、制備了帶有相鄰羥基的單體(N-(2-羥乙基)-N-丙基丙烯酰胺),以N,N-亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑,在硅球載體表面制備表面分子印跡層。通過測定微球?qū)椥缘鞍酌傅奈侥芰Χx微球?qū)椥缘鞍酌傅姆蛛x性能。印跡微球?qū)椥缘鞍酌傅奈侥芰_(dá)到16mg/g以上,并表現(xiàn)出一定的選擇性。熱失重和掃描電鏡結(jié)果表明,硅球表層有一層很薄的印跡聚合物層。3、使用1-芘甲醛,正硅酸乙酯,3-氨丙基三乙氧基硅烷在硅球外表聚合的方式制備彈性蛋白酶的熒光分子印跡傳感器。我們考察了pH,時(shí)間,粒子用量,溫度對熒光響應(yīng)的影響。測試了它的選擇性和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差等。這是一種以硅材料為主體交聯(lián)熒光染料的分子印跡傳感器,具有制備簡單,經(jīng)濟(jì)實(shí)用的優(yōu)點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：彈性蛋白酶 表面分子印跡 膜分離 新型單體 熒光傳感器
【學(xué)位授予單位】：湘潭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O631.3
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第一章 緒論10-22
• 1.1 蛋白質(zhì)分離與檢測的意義10-11
• 1.2 蛋白質(zhì)的分離方法11-14
• 1.2.1 電泳11
• 1.2.2 透析和超濾11-12
• 1.2.3 色譜12-13
• 1.2.4 新材料13-14
• 1.3 蛋白質(zhì)的檢測方法14-17
• 1.3.1 質(zhì)譜14-15
• 1.3.2 電化學(xué)方法15-16
• 1.3.3 光化學(xué)方法16-17
• 1.4 分子印跡17-21
• 1.4.1 分子印跡簡介17-18
• 1.4.2 蛋白質(zhì)分子印跡18-19
• 1.4.3 現(xiàn)狀和展望19-21
• 1.5 本論文的選題意義與主要研究內(nèi)容21-22
• 第二章 分子印跡PVDF膜分離彈性蛋白酶22-32
• 2.1 引言22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分22-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器22-23
• 2.2.2 彈性蛋白酶分子印跡PVDF膜的制備23-24
• 2.2.3 PVDF膜萃取性能的考察24
• 2.2.4 外部條件對印跡和非印跡PVDF膜萃取性能的影響24-25
• 2.2.5 選擇性實(shí)驗(yàn)25
• 2.2.6 印跡PVDF膜的重復(fù)使用性能實(shí)驗(yàn)25
• 2.3 結(jié)果與討論25-31
• 2.3.1 分子印跡PVDF膜的表征25-26
• 2.3.2 模板分子，單體與交聯(lián)劑的比例，溶劑pH與載體PVDF膜用量對膜萃取性能的影響26-28
• 2.3.3 pH，溫度和鹽濃度對膜絲逆流萃取的影響28-30
• 2.3.4 選擇性實(shí)驗(yàn)30
• 2.3.5 重復(fù)使用性實(shí)驗(yàn)30-31
• 2.4 本章小結(jié)31-32
• 第三章 新型單體制備的表面分子印跡硅球選擇性分離彈性蛋白酶32-42
• 3.1 引言32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分32-36
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器32-34
• 3.2.2 N-（2-羥乙基）-N-丙基丙烯酰胺的制備34
• 3.2.3 載體硅球的制備34
• 3.2.4 表面分子印跡聚合物（SMIPs）微球的制備34-35
• 3.2.5 吸附性能測試35
• 3.2.6 吸附動(dòng)力學(xué)35
• 3.2.7 選擇性實(shí)驗(yàn)35-36
• 3.3 結(jié)果與討論36-41
• 3.3.1 表面分子印跡微球的表征36-37
• 3.3.2 吸附量和吸附動(dòng)力學(xué)37-40
• 3.3.3 吸附選擇性40-41
• 3.4 本章小結(jié)41-42
• 第四章 表面分子印跡熒光探針檢測彈性蛋白酶42-51
• 4.1 引言42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)部分42-45
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器42-43
• 4.2.2 表面分子印跡熒光探針的的制備43
• 4.2.3 pH，時(shí)間，粒子用量，溫度對印跡粒子響應(yīng)的考察43-44
• 4.2.4 印跡粒子對目標(biāo)物的響應(yīng)的線性范圍44
• 4.2.5 印跡粒子的選擇性實(shí)驗(yàn)44
• 4.2.6 印跡粒子的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差44-45
• 4.3 結(jié)果與討論45-50
• 4.3.1 表面分子印跡熒光探針的表征45-46
• 4.3.2 pH，，時(shí)間，粒子用量，溫度對印跡粒子的影響46-49
• 4.3.3 彈性蛋白酶的線性范圍49
• 4.3.4 選擇性及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差49-50
• 4.4 本章小結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士期間發(fā)表或待發(fā)表的論文59

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本文編號(hào)：1051121