本文關(guān)鍵詞：線粒體熒光標(biāo)記的單顆粒水平高通量評(píng)估方法

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【摘要】：線粒體是真核細(xì)胞能量代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控中樞,雖然各種靈敏、特異的線粒體熒光標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于線粒體研究,但仍缺乏單線粒體水平的熒光染色性能評(píng)估方法�；诔哽`敏流式檢測技術(shù)(High sensitivity flow cytometry,HSFCM)能對(duì)單個(gè)線粒體進(jìn)行高靈敏、高通量、多參數(shù)定量分析的獨(dú)特優(yōu)勢,本研究發(fā)展了一種單線粒體水平的熒光標(biāo)記高通量評(píng)估方法。將攜帶靶向線粒體綠色熒光蛋白基因的p Ac GFP1-Mito質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人宮頸癌He La細(xì)胞中,用G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞,分別從瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中提取線粒體。此外,從未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的正常He La細(xì)胞中提取線粒體,分別進(jìn)行Mito Tracker Green標(biāo)記以及SYTO 62線粒體DNA染色,應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室自行研制的超高靈敏流式檢測裝置在單線粒體水平對(duì)這4種線粒體標(biāo)記方法的熒光亮度、標(biāo)記效率和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中單個(gè)線粒體的綠色熒光蛋白(GFP)熒光亮度為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的17.7倍,比Mito Tracker Green標(biāo)記的線粒體亮度高約兩個(gè)數(shù)量級(jí),且標(biāo)記穩(wěn)定性好。本研究為線粒體標(biāo)記方法的選擇提供了一種先進(jìn)的分析方法。
【作者單位】： 廈門大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院化學(xué)生物學(xué)系譜學(xué)分析與儀器教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)生物學(xué)福建省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 線粒體 超高靈敏流式檢測技術(shù) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 染料標(biāo)記
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Nos.91313302,90913015,21225523)資助~~
【分類號(hào)】：Q244;O657.3
【正文快照】： 1引言線粒體不僅是細(xì)胞的能量工廠[1],而且還是細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控中樞[2],如自噬、細(xì)胞凋亡、固有免疫等。許多人類疾病均與線粒體功能異常密切相關(guān),包括神經(jīng)退行性疾病、心肌病、癌癥等[3]。因此,線粒體的結(jié)構(gòu)與功能研究對(duì)于疾病診治以及基礎(chǔ)科學(xué)研究具有重要意義[4],

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1038627