多溴聯(lián)苯醚（PBDEs）是一類現(xiàn)在仍被廣泛使用的溴系阻燃劑,具有生物蓄積能力,目前大量存在于生物體和非生物體內(nèi),并且已被證明能嚴(yán)重危害人類健康。多溴聯(lián)苯醌（PBDEQ）是鹵代芳香烴類化合物PBDEs的代謝產(chǎn)物。作為一種醌類物質(zhì),PBDEQ比PBDEs生物活性更高。一般來說,醌（例如:1,4-苯醌、多氯聯(lián)苯醌、雙酚A醌和多環(huán)芳烴氫醌）能同DNA進(jìn)行Michael加成反應(yīng),除此之外,醌類物質(zhì)也能通過半醌自由基或者對苯二酚-半醌類化合物在氧化還原循環(huán)中產(chǎn)生活性氧,進(jìn)而引起氧化應(yīng)激反應(yīng),最終誘導(dǎo)細(xì)胞毒性,遺傳毒性等毒性作用。第一部分:PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞產(chǎn)生遺傳毒性。在本章實驗中我們發(fā)現(xiàn)PBDEQ具有遺傳毒性。首先我們在黃麗華等描述的方法基礎(chǔ)上稍加改進(jìn)合成了2,4-二溴聯(lián)苯醌。然后利用彗星實驗檢測DNA損傷,發(fā)現(xiàn)同對照組相比PBDEQ組細(xì)胞彗星拖尾明顯,DNA損傷嚴(yán)重。利用微核實驗檢測染色體損傷,實驗結(jié)果顯示,同對照組相比PBDEQ組細(xì)胞微核率顯著升高,PBDEQ嚴(yán)重?fù)p傷細(xì)胞染色體。利用8-OHdG釋放實驗檢測DNA氧化損傷,發(fā)現(xiàn)PBDEQ刺激細(xì)胞內(nèi)8-OHdG量顯著升高,PBDEQ誘導(dǎo)... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號對照表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 多溴聯(lián)苯醚
    1.3 多溴聯(lián)苯醚的代謝
    1.4 2，4-二溴聯(lián)苯醌
    1.5 遺傳物質(zhì)損傷
    1.6 Parthanatos細(xì)胞死亡
    1.7 自噬
    1.8 鐵自噬
    1.9 鐵死亡
    1.10 立題意義
第二章 PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞產(chǎn)生遺傳毒性
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗儀器
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 常用溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 2，4-二溴聯(lián)苯醌（PBDEQ）的合成與表征。
        2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.3 western blot實驗
        2.3.4 免疫熒光實驗
        2.3.5 彗星實驗
        2.3.6 微核實驗
        2.3.7 8-OHd G釋放實驗
        2.3.8 統(tǒng)計分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 合成并鑒定PBDEQ
        2.4.2 PBDEQ損傷Hela細(xì)胞的DNA
        2.4.3 PBDEQ損傷Hela細(xì)胞染色體
    2.5 討論
第三章 PBDEQ誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生PARP-1 介導(dǎo)的parthanatos樣細(xì)胞死亡研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗儀器
        3.2.2 實驗試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細(xì)胞存活率檢測實驗
        3.3.2 活性氧檢測實驗
        3.3.3 LDH釋放實驗
        3.3.4 細(xì)胞凋亡檢測實驗
        3.3.5 TUNEL實驗
        3.3.6 線粒體膜電位(MMP)檢測實驗
        3.3.7 western bolt實驗
        3.3.8 免疫熒光實驗
        3.3.9 統(tǒng)計分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性
        3.4.2 PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞發(fā)生氧化損傷
        3.4.3 PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞發(fā)生parthanatos樣細(xì)胞死亡
        3.4.4 PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞發(fā)生的parthanatos樣細(xì)胞死亡依賴于ROS產(chǎn)ROS產(chǎn)生和PARP-1 的激活
        3.4.5 PBDEQ誘導(dǎo)Hela細(xì)胞發(fā)生的parthanatos樣細(xì)胞死亡不依賴于caspasecaspase家族
    3.5 討論
第四章 PBDEQ誘導(dǎo)鐵自噬發(fā)生
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗儀器
        4.2.2 實驗試劑
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.3.2 western blot實驗
        4.3.3 SiRNA轉(zhuǎn)染
        4.3.4 免疫熒光實驗
        4.3.5 谷胱甘肽（GSH）含量檢測實驗
        4.3.6 ROS檢測實驗
        4.3.7 熒光定量PCR實驗
        4.3.8 數(shù)據(jù)分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 PBDEQ誘導(dǎo)自噬發(fā)生
        4.4.2 PBDEQ通過ROS介導(dǎo)自噬的發(fā)生
        4.4.3 PBDEQ通過誘導(dǎo)自噬降解鐵蛋白激活鐵自噬通路
        4.4.4 PBDEQ介導(dǎo)發(fā)生的鐵自噬需要NCOA4參與
    4.5 討論
第五章 PBDEQ誘導(dǎo)鐵死亡發(fā)生
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗儀器
        5.2.2 實驗試劑
    5.3 實驗方法
        5.3.1 細(xì)胞存活率檢測實驗
        5.3.2 Western blot實驗
        5.3.3 二價鐵離子染色實驗
        5.3.4 二價鐵離子檢測實驗
        5.3.5 PI染色實驗
        5.3.6 線粒體染色實驗
    5.4 實驗結(jié)果
        5.4.1 PBDEQ誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鐵離子含量升高
        5.4.2 PBDEQ通過ROS誘導(dǎo)PC12細(xì)胞發(fā)生鐵死亡
        5.4.3 PBDEQ誘導(dǎo)的鐵自噬促進(jìn)鐵死亡的發(fā)生
    5.5 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表科研成果



本文編號：3668911