隨著水環(huán)境污染問題的日益嚴(yán)峻,水環(huán)境中存在大量污染物和致病菌,這些物質(zhì)對(duì)水生生物存在潛在的危害。免疫系統(tǒng)是機(jī)體防御的第一道防線,而Toll-like受體（Toll-like receptor,TLR）信號(hào)通路是激活機(jī)體免疫響應(yīng)的關(guān)鍵通路,其在保護(hù)機(jī)體免受外源致病菌的侵害中發(fā)揮重要作用。稀有鮈鯽作為本土生物在水生態(tài)毒理研究中發(fā)揮越來越重要的作用,而對(duì)稀有鮈鯽免疫毒性效應(yīng)相關(guān)研究很少;為了進(jìn)一步對(duì)稀有鮈鯽參與免疫響應(yīng)重要基因的挖掘和探究其在免疫響應(yīng)中發(fā)揮的免疫毒性監(jiān)測(cè)作用,本實(shí)驗(yàn)首先克隆了稀有鮈鯽免疫響應(yīng)TLR信號(hào)通路中5個(gè)免疫響應(yīng)因子序列并進(jìn)行測(cè)序、分析,檢測(cè)其在各組織中的基礎(chǔ)表達(dá);為了評(píng)價(jià)水環(huán)境污染物對(duì)稀有鮈鯽的免疫毒性效應(yīng),選用了典型農(nóng)藥(毒死蜱（Chlorpyrifos,CPF）、阿維菌素（Avermectin,AVM）)和重金屬(銅(Cu²⁺)、鎘(Cd²⁺))污染物在環(huán)境相關(guān)濃度下暴露稀有鮈鯽,利用定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction）檢測(cè)這5個(gè)基因和通路中其它調(diào)控因子基因的表達(dá)情況...

【文章來源】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
一、前言
    1.1 魚類的免疫系統(tǒng)
        1.1.1 魚類免疫組織和器官
        1.1.2 免疫響應(yīng)因子
            1.1.2.1 魚類特異性免疫因子
            1.1.2.2 魚類的非特異性免疫因子
    1.2 免疫毒性
        1.2.1 農(nóng)藥的免疫毒性
            1.2.1.1 有機(jī)磷農(nóng)藥
            1.2.1.2 生物型農(nóng)藥
        1.2.2 重金屬的免疫毒性
            1.2.2.1 重金屬鎘(Cd²⁺)
            1.2.2.2 重金屬銅(Cu²⁺)
    1.3 稀有鮈鯽簡(jiǎn)介
    1.4 研究目的與意義
二、材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件
        2.1.4 熒光假單胞菌培養(yǎng)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 稀有鮈鯽成魚肝組織RNA的提取
        2.2.2 cDNA第一鏈的合成
        2.2.3 目的基因引物設(shè)計(jì)
        2.2.4 目的基因PCR擴(kuò)增
        2.2.5 目的基因序列分析
        2.2.6 定量PCR引物的設(shè)計(jì)
        2.2.7 定量PCR反應(yīng)
        2.2.8 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因組織表達(dá)分布
        2.2.9 實(shí)驗(yàn)魚的藥物暴露實(shí)驗(yàn)及后續(xù)熒光假單胞菌感染實(shí)驗(yàn)
            2.2.9.1 藥物暴露實(shí)驗(yàn)
            2.2.9.2 藥物暴露及后續(xù)熒光假單胞菌感染實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 酶聯(lián)免疫（ELISA）分析
    2.3 數(shù)據(jù)分析與處理
三、結(jié)果與分析
    3.1 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因的克隆
    3.2 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因序列分析
        3.2.1 目的基因進(jìn)化樹分析
        3.2.2 目的基因結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.3 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因組織表達(dá)分布
    3.3 農(nóng)藥暴露對(duì)稀有鮈鯽的影響
        3.3.1 CPF和AVM暴露對(duì)稀有鮈鯽免疫毒性效應(yīng)
        3.3.2 CPF和AVM暴露及后續(xù)細(xì)菌感染對(duì)稀有鮈鯽免疫的影響
    3.4 重金屬暴露對(duì)稀有鮈鯽的影響
        3.4.1 Cu²⁺和Cd²⁺暴露對(duì)稀有鮈鯽免疫毒性效應(yīng)
        3.4.2 Cu²⁺和Cd²⁺暴露及后續(xù)細(xì)菌感染對(duì)稀有鮈鯽免疫的影響
四、討論
    4.1 稀有鮈鯽TLR信號(hào)通路免疫響應(yīng)因子克隆及分析
    4.2 CPF和AVM暴露對(duì)稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
    4.3 CPF和AVM暴露及后續(xù)細(xì)菌感染對(duì)稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
    4.4 Cu²⁺和Cd²⁺暴露對(duì)稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
    4.5 Cu²⁺和Cd²⁺暴露后續(xù)細(xì)菌感染對(duì)稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
五、結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
附錄3
附錄4
研究生期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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