發(fā)布時間：2021-12-11 21:22

　　隨著水環(huán)境污染問題的日益嚴峻,水環(huán)境中存在大量污染物和致病菌,這些物質(zhì)對水生生物存在潛在的危害。免疫系統(tǒng)是機體防御的第一道防線,而Toll-like受體（Toll-like receptor,TLR）信號通路是激活機體免疫響應(yīng)的關(guān)鍵通路,其在保護機體免受外源致病菌的侵害中發(fā)揮重要作用。稀有鮈鯽作為本土生物在水生態(tài)毒理研究中發(fā)揮越來越重要的作用,而對稀有鮈鯽免疫毒性效應(yīng)相關(guān)研究很少;為了進一步對稀有鮈鯽參與免疫響應(yīng)重要基因的挖掘和探究其在免疫響應(yīng)中發(fā)揮的免疫毒性監(jiān)測作用,本實驗首先克隆了稀有鮈鯽免疫響應(yīng)TLR信號通路中5個免疫響應(yīng)因子序列并進行測序、分析,檢測其在各組織中的基礎(chǔ)表達;為了評價水環(huán)境污染物對稀有鮈鯽的免疫毒性效應(yīng),選用了典型農(nóng)藥(毒死蜱（Chlorpyrifos,CPF）、阿維菌素（Avermectin,AVM）)和重金屬(銅(Cu²⁺)、鎘(Cd²⁺))污染物在環(huán)境相關(guān)濃度下暴露稀有鮈鯽,利用定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction）檢測這5個基因和通路中其它調(diào)控因子基因的表達情況...

【文章來源】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
一、前言
    1.1 魚類的免疫系統(tǒng)
        1.1.1 魚類免疫組織和器官
        1.1.2 免疫響應(yīng)因子
            1.1.2.1 魚類特異性免疫因子
            1.1.2.2 魚類的非特異性免疫因子
    1.2 免疫毒性
        1.2.1 農(nóng)藥的免疫毒性
            1.2.1.1 有機磷農(nóng)藥
            1.2.1.2 生物型農(nóng)藥
        1.2.2 重金屬的免疫毒性
            1.2.2.1 重金屬鎘(Cd²⁺)
            1.2.2.2 重金屬銅(Cu²⁺)
    1.3 稀有鮈鯽簡介
    1.4 研究目的與意義
二、材料和方法
    2.1 實驗儀器和材料
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 實驗動物及飼養(yǎng)條件
        2.1.4 熒光假單胞菌培養(yǎng)
    2.2 實驗方法
        2.2.1 稀有鮈鯽成魚肝組織RNA的提取
        2.2.2 cDNA第一鏈的合成
        2.2.3 目的基因引物設(shè)計
        2.2.4 目的基因PCR擴增
        2.2.5 目的基因序列分析
        2.2.6 定量PCR引物的設(shè)計
        2.2.7 定量PCR反應(yīng)
        2.2.8 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因組織表達分布
        2.2.9 實驗魚的藥物暴露實驗及后續(xù)熒光假單胞菌感染實驗
            2.2.9.1 藥物暴露實驗
            2.2.9.2 藥物暴露及后續(xù)熒光假單胞菌感染實驗
        2.2.10 酶聯(lián)免疫（ELISA）分析
    2.3 數(shù)據(jù)分析與處理
三、結(jié)果與分析
    3.1 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因的克隆
    3.2 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因序列分析
        3.2.1 目的基因進化樹分析
        3.2.2 目的基因結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.3 稀有鮈鯽免疫相關(guān)基因組織表達分布
    3.3 農(nóng)藥暴露對稀有鮈鯽的影響
        3.3.1 CPF和AVM暴露對稀有鮈鯽免疫毒性效應(yīng)
        3.3.2 CPF和AVM暴露及后續(xù)細菌感染對稀有鮈鯽免疫的影響
    3.4 重金屬暴露對稀有鮈鯽的影響
        3.4.1 Cu²⁺和Cd²⁺暴露對稀有鮈鯽免疫毒性效應(yīng)
        3.4.2 Cu²⁺和Cd²⁺暴露及后續(xù)細菌感染對稀有鮈鯽免疫的影響
四、討論
    4.1 稀有鮈鯽TLR信號通路免疫響應(yīng)因子克隆及分析
    4.2 CPF和AVM暴露對稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
    4.3 CPF和AVM暴露及后續(xù)細菌感染對稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
    4.4 Cu²⁺和Cd²⁺暴露對稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
    4.5 Cu²⁺和Cd²⁺暴露后續(xù)細菌感染對稀有鮈鯽免疫響應(yīng)的影響
五、結(jié)論與展望
參考文獻
附錄1
附錄2
附錄3
附錄4
研究生期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國農(nóng)藥使用現(xiàn)狀及對策建議 [J]. 陳曉明,王程龍,薄瑞.  農(nóng)藥科學(xué)與管理. 2016(02)
[2]龍江河突發(fā)環(huán)境事件河流鎘污染化學(xué)形態(tài)模擬 [J]. 董璟琦,張紅振,王金南,張?zhí)熘?  中國環(huán)境科學(xué). 2015(10)
[3]阿維菌素對水生動物安全性及其對寄生蟲驅(qū)殺作用 [J]. 陳進軍,房文紅,王松剛.  科學(xué)養(yǎng)魚. 2015(02)
[4]毒死蜱對稀有鮈鯽不同生命階段的毒性效應(yīng) [J]. 楊亞洲,蔡磊明,孟智啟,劉新洋,王彥華,蔣金花,趙學(xué)平.  農(nóng)藥學(xué)學(xué)報. 2014(01)
[5]阿維菌素對家蠶血細胞DNA變異的影響 [J]. 沈衛(wèi)鋒,孟智啟,王強,牛寶龍,何麗華,劉巖,翁宏飚,陳玉銀.  蠶業(yè)科學(xué). 2011(06)
[6]鎘對鯽淋巴細胞的增殖抑制 [J]. 丁磊.  水利漁業(yè). 2008(02)
[7]斜帶石斑魚黏膜免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的研究 [J]. 羅曉春,李安興,謝明權(quán).  水生生物學(xué)報. 2005(02)
[8]阿維菌素對小鼠次級精母細胞致突變性的研究 [J]. 劉彤,朱蓓蕾.  中國獸醫(yī)科技. 2003(05)
[9]稀有鮈鯽產(chǎn)卵頻次和卵子發(fā)育的研究 [J]. 王劍偉.  水生生物學(xué)報. 1999(02)
[10]稀有鮈鯽胚后發(fā)育和幼魚生長的初步研究 [J]. 王劍偉,宋天祥,曹文宣.  水生生物學(xué)報. 1998(02)



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