隨著人類生產(chǎn)與生活的發(fā)展,環(huán)境污染物對(duì)人類的危害逐漸顯著,人們對(duì)污染物檢測(cè)的精確度要求也日益提高,建立新的、靈敏度高的檢測(cè)方法變得十分重要。本論文主要以增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)和提高檢測(cè)方法選擇性為目標(biāo),基于不同的納米材料研究了能提高檢測(cè)方法的靈敏度的檢測(cè)方法,并設(shè)計(jì)了幾種新的檢測(cè)方法,并將其應(yīng)用于水溶液中BPA和Hg2+的檢測(cè)。本論文包括的內(nèi)容如下:（1）建立了一種高靈敏檢測(cè)BPA的磁性分離熒光適配體傳感器。首先,制備了 NH2-Fe3O4,然后通過(guò)氨基與羧基的溫和化學(xué)反應(yīng),與帶有羧基的捕獲探針通過(guò)肽鍵連接,獲得DNA-納米粒子復(fù)合物。再加入AHN標(biāo)記的適配體,適配體可以通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與捕獲探針形成雙螺旋結(jié)構(gòu)。在BPA存在下,AHN標(biāo)記的適配體更傾向于與BPA特異性結(jié)合,導(dǎo)致BPA適配體從雙螺旋結(jié)構(gòu)中釋放并包裹BPA。這個(gè)過(guò)程中關(guān)鍵的是,適配體與BPA特異性親和力強(qiáng)于與捕獲探針結(jié)合的能力。在沒(méi)有BPA的情況下,AHN標(biāo)記的適配體仍然與捕獲探針雜交,磁性分離后的上清液中不能檢測(cè)到熒光信號(hào)。在最佳優(yōu)化條件下,方法的檢測(cè)限達(dá)到0.047 ng/mL。該方法有效地降低了其他物質(zhì)的干擾,具有良好的選擇性... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１?ＮＨ２－Ｆｅ３０４的透射電鏡圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ＮＨ２－Ｆｅ３〇４??

?ＢＰＡ?＼ｉ??圖２．３適配體傳感器的實(shí)驗(yàn)原理圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２．３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｐｒｉｎｃｉｐａｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ａｐｔａｓｅｎｓｏｒ??４００－??；ＢＭＢ?ＤＮＡ－ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｔｅ??｜：潘＞：ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ?ＤＮＡ－ｆｉａｎｏｐａｒｔｒｃｌｅ??＾?３２０?－?－?．??ｉ２，〇－?？?ｉ??ｉ?Ｆｆｎ?｜ｉ?１１??ｌ１６０＂?■＆：；??Ｉ??ｌｌｌｌ?ＩＩ?ｌｌｌｌ??５?１０?２０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｇ／ｍＬ）??圖２．４?ＤＮＡ－納米顆粒和回收的ＤＮＡ－納米顆粒對(duì)傳感體系的影響。ＢＰＡ??的濃度為?５．００，?１０．０，?２０．０?ｎｇ／ｍＬ??１４??

雜交和培育時(shí)間以及操作溫度在檢測(cè)靈敏度時(shí)起關(guān)鍵作用。??通常，Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ堿基配對(duì)的穩(wěn)定性依賴于ｐＨ［１１８］，ｐＨ值也會(huì)影響熒光??染料的熒光強(qiáng)度。隨著ｐＨ增加記錄熒光信號(hào)（圖２．４）。發(fā)現(xiàn)ｐＨ值在４．０－??７．５時(shí)熒光強(qiáng)度隨ｐＨ的增加而增加，當(dāng)超過(guò)７．５后熒光強(qiáng)度隨之降低。??這可能是因?yàn)椋模危猎谥行云珘A性環(huán)境中相對(duì)穩(wěn)定，而且緩沖液的ｐＨ值??對(duì)適配體的穩(wěn)定性有很大影響［１１９，１２（）］。為了方便后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，選擇７．５??作為傳感系統(tǒng)中的最佳ｐＨ值。??此外，研究了?ＤＮＡ－納米顆粒和ＡＨＮ標(biāo)記的適配體之間的雜交時(shí)間。??盡管培育時(shí)間越長(zhǎng)雜交結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定，但過(guò)長(zhǎng)的培育會(huì)浪費(fèi)時(shí)間并可能導(dǎo)??致非特異性吸附［１２１，１２２］。隨著雜交時(shí)間的增加記錄熒光信號(hào)（圖２．５（ａ））。??發(fā)現(xiàn)熒光強(qiáng)度在４?ｍｉｎ到２４?ｍｉｎ之間逐漸増加，并在２４?ｍｉｎ達(dá)到平臺(tái)。??為確保雜交的完整性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]高靈敏納米生物傳感體系構(gòu)建及在環(huán)境檢測(cè)中的應(yīng)用[D]. 呂笑笑.湖南大學(xué) 2015



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