適配體作為一種新型生物識(shí)別分子,本質(zhì)是一段能夠通過相應(yīng)的結(jié)構(gòu)變化與靶標(biāo)分子以高親和力和高特異性結(jié)合的寡核苷酸序列。適配體的篩選是在體外通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX)完成的,篩選得到的適配體在測(cè)定序列后,即可在一定的化學(xué)條件下重復(fù)合成用于進(jìn)一步的研究,合成條件可控并且合成適配體的性能均一,不受合成批次的影響。相比于目前常用的生物識(shí)別分子---抗體,適配體除了易合成、性能均一外,還具有靶標(biāo)范圍更廣(理論上包括毒性物質(zhì)在內(nèi)的各種小分子、大分子、細(xì)胞甚至生物組織)、生物穩(wěn)定性更好、更易于標(biāo)記修飾且改造后仍可保持良好的生物功能活性等獨(dú)特優(yōu)勢(shì),這都使得適配體成為近幾年分析領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),并與多種分析技術(shù)相結(jié)合,成功應(yīng)用于比色、熒光、電化學(xué)等多種分析檢測(cè)方法的開發(fā)。本研究以適配體技術(shù)為基礎(chǔ)結(jié)合納米金,首次建立了一種利用特定適配體同時(shí)檢測(cè)6種有機(jī)磷農(nóng)藥的納米金比色快速檢測(cè)方法;對(duì)適配體進(jìn)行優(yōu)化,基于片段化適配體熒光淬滅機(jī)理建立了特異性良好的19-去甲基睪酮快速檢測(cè)方法;對(duì)納米金粒徑對(duì)檢測(cè)靈敏度的影響進(jìn)行研究,建立了一種快速有效的滅蠅胺納米金比色檢測(cè)方法。主要研究?jī)?nèi)容包括以下三部分:1.利用一段可與特定有機(jī)磷農(nóng)藥特異性結(jié)合的55個(gè)堿基長(zhǎng)度序列的適配體結(jié)合納米金比色技術(shù),首次建立了基于適配體-納米金比色原理的6種有機(jī)磷農(nóng)藥快速檢測(cè)方法,并成功應(yīng)用于河水實(shí)際樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè),雖然方法的靈敏度還有待提高,但為適配體技術(shù)在農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法中的應(yīng)用提供了新的思路。2.在本課題組關(guān)于適配體長(zhǎng)度對(duì)適配體納米金比色法靈敏度影響的研究基礎(chǔ)之上,我們發(fā)現(xiàn)原長(zhǎng)度76個(gè)堿基的17β-雌二醇適配體在片段化后對(duì)19-去甲基睪酮具有很強(qiáng)的親和性,這可能是因?yàn)槎叩慕Y(jié)構(gòu)相似,而目前針對(duì)19-去甲基睪酮的特異性適配體并未有篩選成功的報(bào)道。因此,我們將17β-雌二醇適配體的片段P1和P2分別標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)BHQ和熒光基團(tuán)6FAM,建立了一種簡(jiǎn)單的基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理的夾心熒光檢測(cè)法,實(shí)現(xiàn)了對(duì)19-去甲基睪酮的有效檢測(cè)。該方法在1μM-1000μM熒光強(qiáng)度與濃度對(duì)數(shù)呈負(fù)相關(guān),優(yōu)化后方法的檢測(cè)限為5μM,并在尿液實(shí)際樣品中成功應(yīng)用,3個(gè)加標(biāo)濃度下所得加標(biāo)回收率為57.94%-118.76%,平均RSD小于7%,方法具有較好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。3.建立了基于納米金比色的滅蠅胺可視化檢測(cè)方法。通過比較一系列不同粒徑(13nm、16nm、30nm、35nm)的納米金溶液的方法靈敏度,最終確定該可視化檢測(cè)滅蠅胺的方法中納米金的最佳反應(yīng)粒徑為30nm。該方法利用了滅蠅胺自身的結(jié)構(gòu)特性以及與納米金之間的結(jié)合特性,在未引入任何額外特定受體的情況下,向納米金溶液中加入滅蠅胺后顏色即可由紅變藍(lán),結(jié)果直觀肉眼可見,也可用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)到相應(yīng)吸光度值的變化,從而建立了超快速的滅蠅胺比色檢測(cè)方法并在河水實(shí)際樣品中得以應(yīng)用。
【學(xué)位單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：O657.3;X832

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2816779